TAQ PLUS DNA聚合酶的应用

背景^[1-6]

TAQ PLUS DNA聚合酶Taq Plus DNA聚合酶是Taq DNA聚合酶与Pfu DNA聚合酶的独特比例混合物。其保真性是Taq DNA聚合酶的4倍，扩增片段的长度可达20 kb(简单模板)。在扩增复杂模板(如GC-rich或重复序列)时，Taq Plus DNA聚合酶的扩增效率高于Taq DNA聚合酶，可用于复杂模板的PCR扩增。扩增产物具有两种末端：平末端与3'-dA。Taq Plus DNA聚合酶重组蛋白是在含Taq Plus DNA基因的大肠杆菌中表达纯化的。

Taq Plus DNA聚合酶集扩增效率高和保真度好于一身，扩增效率比Pfu高，保真度比Taq好。能有效的扩增10kb以下的片段。Taq Plus DNA聚合酶具有Taq酶超强的扩增能力，同时由于Pfu酶的存在也能部分纠正DNA扩增中出现的错误，保真性是Taq DNA聚合酶的3倍左右。

特点:

复杂模板扩增：如含有GC-rich或重复序列的模板。

保真性好：保真性是Taq DNA聚合酶的4倍。

长片段扩增：扩增片段的长度可达20 kb。

溶解建议：提供的Taq Plus DNA聚合酶（Taq Plus DNA）产品溶解于20mM Tris-HCl(pH 8.0),1mM DTT,0.1mM EDTA,100mM KCl,安定剂，50%甘油溶液中。

保存建议：Taq Plus DNA聚合酶（Taq Plus DNA）溶液可以在10℃保存5天；如果想延长保存时间，建议分装后置于-20℃冻存。请避免反复冻融。

应用^[7][8]

TAQ PLUS DNA聚合酶可用于需高保真的PCR反应，一般下情况可代替Taq DNA聚合酶。

普通Taq DNA聚合酶虽然得到广泛使用,但是仍然存在不足。各个实验室针对Taq DNA聚合酶的不足进行了不同形式的改造,以降低或消除酶的5’→3’核酸外切酶活性,提高酶的续进性、忠实性、特异性和耐热性等。

1、在建立我国转基因番木瓜“华农1号”转化体特异性检测方法实验中,研究中首先寻找并验证了一个适合于转基因番木瓜检测的内源参照基因Chymopapain(CHY),建立了其定性和定量PCR检测方法,定性PCR方法中的检测限为25拷贝,定量检测限为12.5个拷贝单倍体番木瓜基因组。

2.为建立新型转基因生物筛选检测方法,我们基于目前转基因作物中含有一些常用的、表达相同性状的外源基因序列相似度高的特点,建立了一种4重兼并引物PCR方法筛选检测转基因作物,可同时检测转基因作物中普遍存在的Cry1Ab、Cry1Ac、Cry1A(b/c)、mCry3A、Cry3Bb1、cp4-EPSPS、bar和/或pat基因,筛选检测范围覆盖了目前90多种商业化转基因作物。

3、建立了一种新型高通量DNA分子分析方法:微滴聚合酶链式反应-毛细管凝胶电泳(Microdroplet PCR Implemented Capillary Gel Electrophoresis,MPIC),该技术包含两步PCR扩增反应和毛细管凝胶电泳分析。

参考文献

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