关附甲素的应用

背景及概述^[1][2]

关附甲素是中药毛茛科黄花乌头中的主要活性物质之一。临床前药理研究表明：盐酸关附甲素可对抗高钙、结扎冠状动脉及乌头碱诱发的室性心动过速和心室颤动，并可对抗乙酰胆碱诱发的心房扑动和心房颤动；可浓度依赖性降低对心肌快反应动作电位的Vmax。膜片钳全细胞法证明该药物抑制快反应心肌细胞的Na⁺内流为主的多离子通道作用，是一个较好的抗心率失常的天然产物。大量临床数据表明，盐酸关附甲素是治疗阵发性室上心动过速和室性心率失常的有效药物，疗效肯定，不良反应少且轻微，为首次发现的全新结构类型的安全、有效的广谱抗心率失常西药一类原创新药。

制备^[1]

2kg关白附药材，粉碎，以60L0.5%（w/w）盐酸渗漉提取48小时， 提取液吸附于8L001×7阳离子交换树脂，取出树脂，晾干，树脂以浓氨水 碱化至pH为9，碱化后的树脂以15L氯仿和甲醇（5:1）混合溶剂回流提取3次，提取液浓缩后加入草酸至pH为1，沉淀，过滤，沉淀以水调成糊状，浓氨水碱化至pH为8，50℃干燥，再以30ml异丙醇复溶，静置析晶， 得粗晶，粗晶以异丙醇-丙酮（1:2）重结晶，过滤，干燥，得到关附甲素 5.8g，收率2.9‰，纯度98.6%。

制剂^[2]

关附甲素冻干乳剂，是一种将药物溶于油中，再在水中乳化分散成300～400nm的微粒，冷冻干燥成稳定的冻干粉，在给药前加入注射用水复溶后静脉给药的制剂。它是以关附甲素为活性成分，再加上药学上常用的注射用油、乳化剂、附加剂、冻干保护剂而成，其中冻干乳制剂各组分的重量份含量为：

关附甲素      0.02～0.14份

注射用油      0.01～2份

乳化剂        0.01～0.6份

附加剂        0.001～0.05份

冻干保护剂    0.05～1份。

一种制备权利关附甲素冻干乳剂的方法，包括如下步骤：

1)将关附甲素溶于注射用油中，作为油相；

2)乳化剂、附加剂和冻干保护剂溶于注射用水中；

3)将油相加入水相中，以8000～10000转/分钟高速分散后，以一级阀1000～1500bar、二级阀150～300bar高压均质得到均匀分散的乳液；其中高压均质后的乳液的粒径需达到150～250nm；

4)乳液过滤灭菌后，在-40～-15℃预冻6～12小时，再以0.1～1℃/min速度升温冷冻干燥10～24小时。

本发明涉及的冻干乳剂复溶成液体乳剂后，粒径可控制在300～400nm之间，实验验证在该粒径范围内，乳剂复溶液在体内具有动力学行为：的血药浓度曲线下面积，最长的平均驻留时间。

应用^[3-4]

注射关附甲素后，观察到坐骨神经慢性压迫性损伤大鼠的机械痛和热敏痛阈值升高，表明关附甲素可降低神经病理痛模型大鼠的痛行为、改善感觉神经的损伤现象。关附甲素处理后同时可下调神经病理痛模型组大鼠背根神经节P2Y受体的表达及胶质纤维酸性蛋白的共表达。关附甲素可降低模型大鼠背根神经节肿瘤坏死因子、磷酸化P38有丝分裂原激活的蛋白激酶蛋白的表达。因此，关附甲素可能通过降低神经病理痛模型大鼠背根神经节卫星胶质细胞P2Y受体的表达、抑制背根神经节P2Y受体介导的炎性伤害性信息传递，减轻坐骨神经压迫性损伤所致的神经病理痛大鼠的痛行为。

欧阳松等人应用微电极阵(MEA)技术研究关附甲素(GFA)对兔心室肌晚钠电流(INaL)及兴奋传导速度(ECV)的影响。方法:新西兰大白兔64只，随机分成4组:对照组(8只)，GFA组(1、3、10μmol/L，每种浓度各8只)，海葵毒素组(ATXⅡ，8只)，ATXⅡ+GFA组(1、3、10μmol/L，每种浓度各8只)。开胸取出心脏后进行langendroff灌流，用柔性电极贴附左心室，记录各项电生理信号的变化。

结果:与对照组相比，GFA 1μmol/L组、3μmol/L组、10μmol/L组心室肌场电位时限(fAPD)分别缩短至(338.88±10.93)、(327.13±11.57)、(314.25±9.38)ms(P<0.05)，ECV分别减慢至(0.51±0.10)、(0.38±0.11)、(0.25±0.07)m/s(P<0.05);ATXⅡ组fAPD明显延长(P<0.05)，ECV则无明显变化(P>0.05)。与ATXⅡ组相比，ATXⅡ+GFA 1μmol/L组、3μmol/L组、10μmol/L组心室肌fAPD分别缩短至(349.38±11.67)、(330.88±11.09)、(318.50±11.05)ms(P<0.05)，ECV分别减慢至(0.51±0.10)、(0.41±0.08)、(0.30±0.07)m/s(P<0.05)，其fAPD缩短率明显高于GFA组。结论:GFA具有抑制INaL与减缓ECV的作用，可能为其抗心律失常的主要机制。

主要参考资料

[1] CN201310097092.5 一种关附甲素及其盐的制备方法

[2] CN200910264208.3 关附甲素冻干乳剂及其制备方法

[3] CN201811137226.0 关附甲素在制备神经病理痛药物中的应用

[4]欧阳松，张晓雅，侯月梅.关附甲素对兔心室肌晚钠电流及兴奋传导速度的影响[J].临床心血管病杂志，2016，32(12):1250-1253.