SilverXpress Silver Staining Kit的应用

背景^[1-6]

SilverXpress Silver Staining Kit是一种高灵敏度的银染试剂盒，具有纳克级灵敏度，背景最小。其易于遵循的方案比标准的Coomassie®染色需要更少的总时间，并且在1小时内完成。SilverXpress Silver Staining Kit使用氨性银化学和戊二醛致敏产生高度敏感的银染色，能够检测比标准Coomassie®或胶体蓝技术低得多的蛋白质。清晰的背景使样品识别明确无误，并提供出版品质的凝胶。

特点^[1]

银染试剂盒的特点：

•灵敏的银染试剂—可检测低至0.25ng的蛋白；具有和其他品牌单色金属银染产品相同或更好的灵敏度

•背景干净—对蛋白凝胶进行强染色，背景颜色、阴影和着色异常极低

•性能优越—试剂及实验方案均经过优化，即使用户技术差异很大，也可确保获得良好的染色结果

•快速灵活的实验方案—整个常规流程耗时约1.5小时，某些步骤可过夜进行或缩短，对结果基本没有影响

•凝胶兼容性—兼容多种商业化预制小型凝胶及SDS-PAGE缓冲液系统，获得极佳的染色效果

•流程兼容性—温和的化学配方确保兼容质谱分析、测序及其他需要进行脱色和蛋白回收的下游应用

SilverXpress Silver Staining Kit是一种金属银（Ag）蛋白染料，可获得极其干净和均匀的凝胶背景，每次使用均可获得一致的高灵敏度染色结果。在标准小型凝胶中，可检测蛋白含量高于0.25ng的条带或印迹。实验流程经过优化，可灵活进行短时间或过夜固定和染色，而不会影响染色效果（灵敏度或清晰度）。在凝胶固定后进行短时间（一分钟）敏化有助于获得无暗影或污点背景的染色结果，有助于对银染凝胶进行光密度分析，这是自制或其他商业化银染产品无法实现的。 

其他特点：

•凝胶固定步骤可在30分钟内完成或放置过夜

•凝胶染色可在5分钟到20小时内完成（视灵敏度而定）严格的生产流程及周密的质量测试确保Pierce银染试剂盒在每次使用中均可获得出色结果，不受聚丙烯酰胺凝胶类型或所用缓冲液系统的影响。大多数纳克或低于纳克级蛋白均可轻松检测，背景信号水平极低（参见本介绍最后的其他信息部分）。实验流程清楚说明了如何将固定和染色步骤延长至过夜而不影响效果，这进一步增强了便利性。同样，默认的30分钟染色步骤也可缩短至5分钟，从而在凝胶固定后20分钟内完成染色。

银染法通常使用戊二醛或甲醛，这些成分会造成蛋白间及蛋白和凝胶基质间发生共价交联，而这种交联从某种意义上来说会抑制从凝胶上提取或洗脱蛋白。Pierce银染方法在染色及显影溶液中使用了甲醛，不过其浓度极低，将不可逆蛋白交联降到最低。而在用于质谱的Pierce银染试剂盒(产品货号24600)实验方案中，我们使用了相同的银染试剂，不过进行了些一定程度的优化，以提高回收率而不影响灵敏度。

应用^[7][8]

用于新癌基因NGAL的新型TPA反应激活蛋白的分离与初步鉴定。

应用寡核苷酸亲和层析法,改进后的寡核苷酸亲和层析法和离心管层析法从TPA诱导后的食管癌细胞EC109中分离调控NGAL诱导表达的TPA反应激活蛋白,通过EMSA、SDS-PAGE结合银染判定这三种方法的优缺点,并应用生物质谱结合生物信息学等手段对这些蛋白进行初步鉴定。寡核苷酸亲和层析法能够分离纯化一定丰度的TPA反应激活蛋白,但存在较多Tween 20的干扰;离心管层析法操作流程简单,快捷,但获得的激活蛋白较少,不利于下一步的质谱鉴定;改进后的寡核苷酸亲和层析法排除了Tween 20的干扰,能够分离纯化低背景、高丰度的激活蛋白。通过生物质谱并结合生物信息学等手段分析,初步筛选出12个调控NGAL诱导表达的TPA反应激活蛋白,这其中大部分为尚未报道的新型TPA反应激活蛋白。通过本实验,建立了稳定的改进后寡核苷酸亲和层析法技术平台,并初步筛选出12个调控NGAL表达的新型TPA反应激活蛋白。

参考文献

[1]Methods for transcription factor separation.Robert A,Harry W.Journal of Chromatography.2003

[2]Affinity purification of DNA-binding proteins.Gadgil H,Shilpa A,Harry W.Journal of Biochemical and Biophysical Methods.2001

[3]The High Molecular Weight Urinary Matrix Metalloproteinase(MMP)Activity Is a Complex of Gelatinase B/MMP-9 and Neutrophil Gelatinase-associated Lipocalin(NGAL).Yan Li,Niels Borregaard,Lars Kjeldsen.Journal of Biological Chemistry.2001

[4]Oligonucleotide trapping method for purification of transcription factors.Gadgil H,Harry W.Journal of Chromatography.2002

[5]Isolation of DNA-protein complexes based on streptavidin and biotin interaction.Leblond-Francillard M,Dreyfus M,Rougeon F.European Journal of Biochemistry.2001

[6]Covalent attachment of DNA to agarose.Improved synthesis and use in affinity chromatography.Arndt-Jovin DJ,Jovin TM,Bahr W,et al.European Journal of Biochemistry.1975

[7]Human neutrophil gelatinase-associated lipocalin and homologous proteins in rat and mouse.Kjeldsen L,Cowland JB,Borregaard N.Biochimica et Biophysica Acta.2000

[8]缪成贵. 新癌基因NGAL的新型TPA反应激活蛋白的分离与初步鉴定[D].吉林大学,2007.