吖啶红的应用

背景及概述^[1][2]

1900年，Raab偶然发现吖啶红（acridinered）和闪电共同作用可迅速杀死草履虫，但单独的吖啶红或闪电或吖啶红经闪电照射后再加入草履虫培养液中却不能杀死草履虫。吖啶红是阳离子三环杂芳香类荧光染料,在适量的阳离子表面活性剂十二烷基磺酸钠存在下形成二聚体,其自聚平衡随着蛋白质的加入而被破坏。

理化性质^[1]

吖啶红是阳离子三环杂芳香荧光染料，能产生特征荧光，于荧光分光光度计上在500～600nm范围内扫描，得激发波长为524nm，发射波长为546nm，荧光光谱如图所示，羟自由基(OH)迅速氧化吖啶红,使溶液褪色,526nm处吸光度降低,降低程度与羟自由基的产生量有关;抗氧化剂可与羟自由基反应而部分清除羟自由基,使与吖啶红反应的羟自由基减少,溶液在526nm处吸光度下降程度减弱.抗氧化剂对羟自由基清除率的大小即表示其抗氧化活性的强弱。

吖啶红本身显红色,不，受酸度的影响,但被羟自由，基氧化的程度与酸度有关，在稀H2SO4介质中吖啶红，可迅速被羟自由基氧化褪，色.稀硫酸的用量太少,反，应缓慢,用量太多则体系不，稳定,重现性差.当硫酸浓，度为4.00*10^-3mol/L时，反应较快且体系稳定。

应用^[3]

1、吖啶红-共振荧光光谱法测定水溶液中的苯酚

在硫酸介质中吖啶红的分子共振荧光信号强，发射峰尖而对称，受干扰因素少。基于苯酚能抑制KBrO3氧化吖啶红的反应，建立了阻抑动力学共振荧光分析法测定痕量苯酚。方法的线性范围为8.5-10-4~1.00mg/L苯酚，检出限0.26 μg/L。本方法用于环境水样中苯酚的测定，RSD小于2.94%，样品加标回收率为97.5%~102.5%。

2、荧光染料吖啶红作测定蛋白质的生物探针

简述染料结合分析法的发展过程，吖啶红染料自聚体系测定蛋白质的试验条件和测定结果。阳离子荧光染料吖啶红及其自聚的二聚体的可平衡转化，形成自聚平衡体系，在表面活性剂十二烷基磺酸钠的存在下，蛋白质的定量加入可调节这一平衡，从而引起体系荧光有规律的变化。方法线性范围宽、灵敏度高、反应速度快、准确度高、抗干扰能力强，是染料分析法定量测定蛋白质的最新方法之一。

3、吖啶红荧光法检测Fenton反应产生的羟自由基

提出检测Fenton反应产生羟自由基的方法。羟自由基与吖啶红发生反应后，吖啶红的荧光强度减弱，测定其荧光强度的变化，可间接测定羟自由基的产生量。试验结果表明，ΔF与吖啶红、硫酸铁及过氧化氢呈量效关系，发现抗氧化剂硫脲清除羟自由基作用呈明显的量效关系，方法稳定性好、操作简便、测定快速，测定了几种辛辣性食品的抗氧化性。

4、吖啶红光度法测定荸荠皮的抗氧化活性

在稀硫酸介质中，羟自由基能迅速氧化吖啶红而使其褪色，溶液在526nm处的吸收减弱。荸荠皮水提取液(AEETP)在400~700nm范围内无明显吸收。在吖啶红+羟自由基体系中加入AEETP，可以部分清除羟自由基，使溶液在526nm处的吸收显著增强。

在硫酸浓度为4.00-10-3mol/L、吖啶红浓度为2.73-10-7mol/L、过氧化氢浓度为2.65*10^-5mol/L、FeSO4浓度为3.40-10-5mol/L和反应时间为15min的实验条件下，AEETP的加入量在0~1.75mL范围内，吸光度增加值与AEETP加入量成线性关系，回归方程为A526=0.0636VAEEP+0.3466，相关系数R=0.9952。在相同的实验条件下，测得AEETP对羟自由基的清除率为33.7%。实验结果说明，料液比为1-10的AEETP稀释5.7倍后，仍具有较强的抗氧化活性。

主要参考资料

[1] 梁爱惠, 蒋治良, & 陶慧林. (2007). 一个灵敏测定过氧化氢的吖啶红共振散射光谱新方法. 光谱学与光谱分析, 27(1), 120-122.

[2] 刘希东, & 刘绍璞. (1998). 吖啶红催化动力学光度法测定痕量亚硝酸根. 分析化学(4), 491-491.

[3] 陈鸿琪, & 夏闽. (2001). 荧光染料吖啶红作测定蛋白质的生物探针——蛋白质的染料分析法新进展. 理化检验(化学分册), 37(2), 53-55.