哈尔满碱的应用

发布日期:2020/4/20 7:34:25

背景及概述^[1]

沙棘，又称醋柳、酸刺，是一种多年生的灌木或小乔木，属于胡颓子科沙棘属富含生物活性物质的天然植物。沙棘果中除含有蛋白质、脂肪、碳水化合物外，还有人体必需的多种维生素和无机盐，其中维生素含量丰富，尤以VＣ含量为高，几乎居一切果蔬之冠。沙棘果具有很高的食用和药用价值。沙棘果含有沙棘黄酮、超氧化物歧化酶、ω-6多不饱和脂肪酸、哈尔满碱、5-羟色胺等对人体具有特殊保健作用的生物活性物质。具有活血化瘀、化痰宽胸、补脾健胃、生津止渴、清热止泻、消炎生肌、抑制肿瘤等功效。沙棘产品在食品和药品行业被广泛应用，倍受企业和相关行业的青睐。

哈尔满碱，异名去甲氧去氢骆驼蓬碱；2-甲基-Ｂ-咔啉；3-甲基-4-咔啉，广泛存在于革盖菌、蘑菇和植物体，属于Ｂ-咔啉生物碱。分子式为C12H10N2，分子量为182.22，为黄褐色粉末或结晶体，熔点230～232℃，在紫外灯下呈亮蓝色荧光。

应用^[1-3]

哈尔满碱主要用于真菌所致的癣类皮肤病、湿疹、烧伤、静脉曲张性溃疡等症（趾间发癣菌，MIC＝1.6～200.0μg/mL）；低剂量时为运动抑制剂，高剂量时引起惊厥；抑制活性钠转移，Ｎａ＋，Ｋ＋-腺苷三磷酸酶抑制剂；植物生长调节剂；子宫兴奋剂。临床上将哈尔满用于治疗肾上腺素或去甲肾上腺素水平低下所引起的疾病。可活血散瘀、治咳嗽、劳伤吐血、跌打、月经不调。

有研究观察穿山龙提取物(extractfromDioscoreaenipponicaeRhizoma,DNR)联合哈尔满碱(harmane)对人肝癌细胞(HepG2)增殖抑制作用及诱导凋亡的机理。方法采用MTT法检测药物对细胞的生长抑制作用,应用等效曲线-相互指数法(isobole-interactionindexmethod)评价两药的相互作用,倒置显微镜观察细胞形态学变化,流式细胞仪(FCM)检测细胞凋亡率,Western印迹法检测凋亡蛋白procaspase-3的表达。

结果穿山龙提取物(DNR)与哈尔满碱质量浓度比为2∶1时,I(相互指数)=0.768<1,联合用药具有协同作用;质量浓度比为1∶2时,I=1.041≈1.0,联合用药具有相加作用。FCM法检测联合用药48、72h细胞凋亡率与单独用药相比分别增加了10.44%、50.06%,差异具有统计学意义(P<0.05)。Western印迹法检测联合用药诱导HepG2细胞凋亡的机制之一可能与procaspase-3蛋白的表达有关。结论DNR联合哈尔满碱在体外有明显的协同抗肿瘤的作用,其可能的机制是影响procaspase-3蛋白的表达。

制备^[1]

工艺过程：分为二部分。

部分是沙棘的前处理。沙棘果是资源利用的源头，通过对不同部位原料的处理，可以得到沙棘果汁、沙棘种籽等用于高附加值产品开发的产品，沙棘皮渣经过干燥粉碎后，用来进行下一步实验，提取目标产物。工艺流程如下：

第二部分是目标产物的提取，工艺流程如下：

操作要点：

1）沙棘果枝条的采收和清洗

采集的带果沙棘枝条长度小于5ｃｍ，粗小于6ｍｍ，可带少许叶；剔出生青果、病烂果和泥浆果，以及石块、金属器具等硬物、异物。采集的沙棘果须用木制或竹制容器盛装，不得用其他材料制成的容器盛装。清洗用水必须符合GＢ5749的规定，加工环境要清洁卫生，尽量消除有害生物的发生繁殖，防止有害生物接触加工和处理设备。

2）离心取汁

沙棘果经冲洗干净后用ＰＫ-121Ｒ离心机高速（4000转/min）离心分离，得清汁，清汁收集后用于生产沙棘汁为原料的其他产品，如沙棘饮料、沙棘酒、沙棘果醋、沙棘口服液、沙棘果粉、沙棘维生素Ｐ粉等产品。沙棘果离心机转速要求3500～4500转/min、离心6min时，出汁率达78％以上。

3）种籽与果皮的分离

沙棘果经离心机高速（4000转/min）离心分离后得到果皮与种籽，经过晾晒、脱皮、筛选等工序，分离出其中的沙棘种籽、枝条，收集果皮渣。沙棘果皮渣经过干燥、粉碎、过筛后备用，做为提取哈尔满碱的原料。

4）目标产物的提取

采用超声波提取法，以乙醇为溶剂，通过实验，确定适宜的乙醇体积分数、提取温度、料液比、提取时间及提取次数，得出哈尔满碱提取参数。

5）树脂纯化

将大孔树脂Ｄ101用95％乙醇浸泡24h，使其充分膨胀，湿法装柱，然后用95％乙醇液洗至流出液无白色混浊现象，再用去离子水洗净乙醇，直至流出液无浑浊为止。取优化工艺的提取液，确定提取液与树脂用量（柱体积）比约为1∶1（g/mL）上样，选用洗脱剂为80％乙醇，洗脱体积为5个柱体积，收集洗脱液，薄层层析判断有效成分。有效洗脱成分减压浓缩滤液，真空干燥。

6）检测

对所得的目标提取物，用高效液相色谱法进行测定。采用超声波提取法，以乙醇为溶剂，通过实验，得出哈尔满碱提取参数。确定适宜的乙醇体积分数为90％、提取温度为70℃、料液（V∶ｍ）比35，提取时间70min，提取次数为2次，提取液经大孔树脂纯化，最后用高效液相色谱法检测目标产物含量。通过所设计工艺进行沙棘皮渣中哈尔满碱的提取和分离，1000g沙棘皮渣中可提取到32％的哈尔满提取物7.67g。