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京尼平苷的作用

发布日期:2020/4/9 8:01:46

背景及概述[1][2]

京尼平苷是一种环烯醚萜葡萄糖苷,易溶于水。京尼平苷可被β-葡萄糖苷酶水解为京尼平。现代研究表明,京尼平苷对消化系统、心血管系统和中概神经系统疾病均有显著疗效,此外,京尼平苷还有一定的抗炎和治疗软组织损伤的作用。京尼平苷除了药用以外,在其它领域也得到广泛的应用,如可用作植物增产剂、生物检测剂等,是一种重要的生物活性物质。在医疗、保健品领域应用广泛。

制备[1]

制取杜仲叶中京尼平苷的方法步骤包括:

1、原料叶的粉碎:干燥的杜仲叶,其含水量≤14%,用常规方法粉碎后过80目筛;

2、酶法辅助中温水提取:将粉碎的原料叶中加入一定量的水,调节pH为4.5,并恒温 至50℃~60℃,加入适量的纤维素酶在下列条件下进行提取:纤维素酶添加量为底物浓度的 0.2%,即每千克原料叶需消耗0.002千克的纤维素酶、杜仲叶∶水的质量比=1∶12、提取2 次、每次60~90min;

3、过滤:合并两次提取液后,用常规过滤方法除去悬浮物等杂质;

4、超滤膜除杂:本发明采用过滤孔径为0.02~0.0.06μm的超滤膜处理杜仲叶水提液,该膜能截留几乎全部的大分子蛋白质及多糖等杂质,而京尼平苷分子量为400Dal左右可以完 全透过,该膜的操作条件为:P=0.2~0.6Mpa,T=30~50℃,PH=4~5,Q=60~70L/min;

5、纳滤浓缩:本发明采用拦截分子量为200~400Dal的纳滤膜对一级膜滤液进行浓缩,并能部分脱盐。该级膜浓缩倍数可达15倍以上,无机盐离子去除率可达60%。该膜的操作条 件为:P=1.0~1.5Mpa,T=30~60℃,PH=4~5,Q=20L/min。

6、大孔树脂的分离纯化:纳滤膜浓缩液通过大孔树脂进行吸附洗脱,先用2倍树脂杜 体积的纯水洗去杂质,然后用2.5倍树脂柱体积的体积百分比浓度为70%乙醇洗脱,收集乙醇洗脱液。

7、浓缩及干燥:将收集的乙醇洗脱液通过常规减压浓缩和真空干燥后可得到京尼平苷粉末。

以下的有益效果:

1、酶法中温水提取杜仲叶中的京尼平苷,纤维素酶的加入有助于打破叶细胞壁,释放 细胞内的京尼平苷,提取率可达到95%,水提温度较低、提取时间缩短,节约能耗。

2、采用超滤膜对提取液进行分离纯化,能有效分离其他副产物,膜操作过程简单,膜通量能长时间稳定,易于清洗、使用寿命长,易于实现工业化。

3、采用纳滤膜对除杂后的提取液进行浓缩,脱盐率可达60%,能减轻后续工艺的负荷,延长树脂的使用寿命及节约能耗,纳滤滤液COD值≤100,可以回用生产工序,基本无废水排 放。

4、采用大孔吸附树脂能有效纯化京尼平苷,本工艺所选用的树脂为极性大孔吸附树脂, 其对京尼平苷吸附量大、分离效果好,仅用少量溶媒集中洗脱并分段收集,就能制得较高纯度京尼平苷。经过本工艺制得的粉末中京尼平苷含量大于80%,提取率大于1.2%。

药理作用[2-3]

李皓等人探讨了京尼平苷对硝普钠诱导大鼠软骨细胞凋亡的保护作用及机制。方法:取8周龄的SPF级SD大鼠20只,颈椎脱臼处死后,酶消化法提取膝关节软骨细胞。采用硝普钠终浓度0. 75、1. 00、1. 50、2. 00 mmol/L,分别加入6孔板软骨细胞中,选取合适终浓度诱导软骨细胞凋亡。终浓度分别为20、40、80、160μg/L的京尼平苷加入96孔板软骨细胞,24 h后CCK-8检测京尼平苷抑制软骨细胞增殖的效果。选择硝普钠终浓度为1 mmol/L,京尼平苷终浓度分别为80、160μg/L的6孔板软骨细胞中,Hoechst34580染色观察凋亡软骨细胞核形态,罗丹明(Rho) 123染料检测线粒体膜电位,流式细胞技术检测软骨细胞凋亡; Western印迹法检测凋亡软骨细胞内诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、Bax蛋白水平。

结果硝普钠适宜浓度为1. 00 mmol/L,且细胞凋亡数与硝普钠浓度呈正相关(P<0. 05)。京尼平苷在20~160μg/L浓度范围内对体外培养二代软骨细胞无增殖抑制效果(P>0. 05)。80、160μg/L的京尼平苷对SNP诱导软骨细胞凋亡有一定保护作用,呈剂量依赖(P<0. 05);京尼平苷可降低凋亡软骨细胞中iNOS、Bax的表达(P<0. 05)。结论:京尼平苷对硝普钠诱导大鼠软骨细胞凋亡有一定的保护作用,其机制可能是通过降低软骨细胞iNOS的表达、抑制软骨细胞的凋亡。

白涛等人观察了京尼平苷对大鼠胰岛β细胞系(INS-1)增殖及凋亡的影响。方法:用CCK-8法测定细胞增殖,用毒胡萝卜素处理细胞后,用流式细胞仪测定细胞凋亡率,并用CCK-8法测定细胞活力。结果:京尼平苷同胰高血糖素样肽1(GLP-1)一样能促进INS-1的增殖,并有浓度依赖性;京尼平苷同GLP-1一样能抑制毒胡萝卜素处理后的细胞凋亡,并有浓度依赖性;同时京尼平苷能抑制毒胡萝卜素对细胞的毒性作用。结论:京尼平苷能促进INS-1细胞增殖,抑制INS-1细胞凋亡。

主要参考资料

[1] CN201210425767.X 一种制取杜仲叶中京尼平苷的方法

[2] 李皓,李仁嵩,肖志刚,陈森.京尼平苷对老年大鼠软骨细胞凋亡的保护作用及机制[J].中国老年学杂志,2019,39(01):168-172.

[3] 白涛,任乐乐,刘萌萌,高璟英,郭阳艳,任毅,刘云峰,章毅.京尼平苷对INS-1细胞增殖与凋亡的影响[J].中西医结合心脑血管病杂志,2018,16(21):3110-3113.

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