人钙蛋白酶1(Calpain1)ELISA试剂盒

背景^[1-7]

人钙蛋白酶1(Calpain1)ELISA试剂盒采用酶联免疫方法，48T/96T两种规格的试剂盒，48T包装可测42个标本，96T的包装可测87个标本。人钙蛋白酶1(CAPN1)检测试剂盒间接法简单操作步骤：

（1）将特异性抗原与固相载体联结，形成固相抗原；

（2）加稀释的受检血清，保温反应，血清中的特异抗体与固相抗原结合，形成固相抗原抗-体复合物；

（3）加酶标抗抗体；

（4）加入酶促反应底物，发生显色反应，显色的深浅与待测抗体的量成正比。

人钙蛋白酶1(CAPN1)检测试剂盒有以下操作技巧：

A、加酶试剂后用吸水纸在酶标板表面轻拭吸干。

B、合理安排检测量，以免反应板过多造成洗板等待时间长。

C、吸取液体时，要用量程和需要量接近的枪去吸，减少误差。

D、要尽量做双孔实验，这样才既能保证数据的准确性，又能反映出试剂盒的精密度。

E、样品稀释液应用加液器加注，并经常校对其准确性。

人钙蛋白酶1(CAPN1)检测试剂盒储存条件和试剂盒准备：

1.有效期内的试剂如开封后未用完，请2-8°C保存。

2.过期的试剂请不要用，打开后的试剂2-8°C保存。

3.酶标包被板必须2-8°C保存，如有未用完的酶标包被板，打开的铝箔袋须密封并2-8°C保存。

应用^[8][9]

人钙蛋白酶1(Calpain1)ELISA试剂盒可用于microRNA-124a在大鼠损伤脊髓中的表达及与钙蛋白酶1的相关分析研究：

大鼠急性脊髓损伤后microRNA-124a(miRNA-124a)和钙蛋白酶1(calpain1)基因表达变化及二者间的关系，为探寻脊髓损伤潜在的干预靶点提供实验依据。方法：采用改良Allen，s法建立大鼠急性脊髓损伤模型；将108只大鼠随机分为无脊髓损伤组（A组、对照组，18只）、脊髓损伤组（B组、实验组、SCI组，包括SCI后6h、12h、24h、3d、7d组，每组18只）；各组分别于相应实相行BBB评分评价神经功能、HE染色观察组织形态学变化、实时荧光定量PCR及原位杂交检测miRNA-124a和calpain1基因表达。

结果：1、BBB评分：各损伤组较对照组BBB评分明显降低，差异均有统计学意义。2、HE染色：正常脊髓组织神经元形态结构正常；损伤后6h脊髓组织出现广泛水肿；12-24h后发展为坏死组织，急性炎性细胞浸润播散到灰质；损伤后24h-7d，血管通透性增加，神经细胞广泛溶解、坏死，并有大量炎症细胞浸润。3、实时荧光定量PCR：各损伤组脊髓组织中miRNA-124a的表达均降低，与对照组比较，差异均有统计学意义（P<0.05）；脊髓损伤后calpain1表达逐渐增高，24h时达到高峰，随之下降，至3d时表达仍高于A组,差异有统计学意义(P<0.05)，7d时calpain1不表达或低表达，与对照组比较，差异无统计学意义（P>0.05）。

急性脊髓损伤后miRNA-124a、calpain1两种基因的表达呈显著负相关(r=-0.89)。4、原位杂交：miRNA-124a、calpain1mRNA主要表达于大鼠脊髓腹角运动神经元，二者的细胞内定位为胞浆染色。miRNA-124a主要表达于对照组及脊髓损伤后7d组，而calpain1mRNA主要表达于脊髓损伤后6h、12h、24h、3d组。结论：脊髓损伤后miRNA-124a基因表达显著降低，而calpain1的表达明显上调，二者呈显著负相关；calpain1基因表达可能受调于miRNA-124a。

参考文献

[1]Direct Reprogramming of Adult Human Fibroblasts to Functional Neurons under Defined Conditions[J].Rajesh Ambasudhan,Maria Talantova,Ronald Coleman,Xu Yuan,Saiyong Zhu,Stuart A.Lipton,Sheng Ding.Cell Stem Cell.2011(2)

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[5]MicroRNA-9 Coordinates Proliferation and Migration of Human Embryonic Stem Cell-Derived Neural Progenitors[J].Celine Delaloy,Lei Liu,Jin-A Lee,Hua Su,Fanxia Shen,Guo-Yuan Yang,William L.Young,Kathy N.Ivey,Fen-Biao Gao.Cell Stem Cell.2010(4)

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[8]microRNAs miR-124,let-7d and miR-181a regulate Cocaine-induced Plasticity[J].Vijay Chandrasekar,Jean-Luc Dreyer.Molecular and Cellular Neuroscience.2009(4)

[9]陈金国.microRNA-124a在大鼠损伤脊髓中的表达及与钙蛋白酶1的相关分析[D].福建医科大学,2013.