小鼠骨髓来源内皮祖细胞

背景^[1-6]

小鼠骨髓来源内皮祖细胞采用Ficoll密度梯度离心法从小鼠骨髓中分离单个核细胞，种植于人纤维粘连蛋白包被的培养瓶中，利用序列差速贴壁法分离、纯化细胞早晚期内皮祖细胞。比较早晚期内皮祖细胞在细胞形态、DiI-LDL及FITC-UEA-1摄取能力、细胞的免疫表型、生长增殖能力及体外形成管腔结构能力的差别。

小鼠骨髓来源内皮祖细胞分离自骨髓；骨髓是机体的造血组织，位于身体的许多骨骼内。成年动物的骨髓分两种：红骨髓和黄骨髓。红骨髓能制造红细胞、血小板和各种白细胞。血小板有止血作用，白细胞能杀灭与抑制各种病原体，包括细菌、病毒等；某些淋巴细胞能制造抗体。因此，骨髓不但是造血器官，它还是重要的免疫器官。

骨髓是存在于长骨（如肱骨、股骨）的骨髓腔和扁平骨（如髂骨）的稀松骨质间的网眼中，是一种海绵状的组织，能产生血细胞的骨髓略呈红色，称为红骨髓。出生时，红骨髓充满全身骨髓腔，随着年龄增大，脂肪细胞增多，相当部分红骨髓被黄骨髓取代，最后几乎只有扁平骨骨髓腔中有红骨髓。

内皮祖细胞是血管内皮细胞的前体细胞，亦称为成血管细胞（Angioblast），是一群具有游走特性，能进一步增殖分化的幼稚内皮细胞，缺乏成熟内皮细胞的特征性表型，不能形成管腔样结构，其功能主要为参与了出生后缺血组织的血管发生和血管损伤后的修复。研究显示，内皮祖细胞在心脑血管疾病、外周血管疾病、肿瘤血管形成及创伤愈合等方面均发挥重要作用，并为缺血性疾病的研究治疗提供了新思路，EPCs生物学特性和治疗作用的研究成为这一领域新的热点。

应用^[7][8]

小鼠骨髓来源内皮祖细胞可用于小鼠骨髓来源内皮袓细胞防治动脉粥样硬化及其机制的研究：

动脉粥样硬化（atherosclerosis,AS）由于高发病率、高致残率和高死亡率严重威胁人类的生存质量和期望寿命。作为众多心血管疾病发生的病理基础和关键环节，AS防治已成为全世界共同关注的重大课题。动脉内皮细胞的损伤和功能失调被认为是AS发生的始动环节和重要的病理基础，因此，受损动脉内皮单层的恢复和重建成为防治AS的必要条件。传统的观点认为内皮细胞可通过增殖并迁徙至受损区域，发挥修复功能，但是成熟的内皮细胞增殖能力非常有限。

近年来的研究表明内皮祖细胞（endothelial progenitor cells,EPCs）强大的修复血管内皮的作用可减缓动脉粥样硬化的进程，因此，通过药物动员内源性EPCs，从而增加循环中EPCs的数量，加速损伤内膜的重新内皮化成为防治AS的有效途径。三七皂苷（panax notoginseng saponins,PNS）是活血化瘀中药三七的主要活性成分，本室前期的实验结果表明PNS通过多途径防治AS。PNS通过对骨髓来源EPCs的动员、增强损伤血管内皮化与其防治AS的关系，并初步揭示其相关机理，以期为深化三七内皮保护及AS防治作用机制提供新的实验依据。

方法：8周龄apoE-/-小鼠均予以高脂饲料并随机分为模型组、PNS低剂量组和PNS高剂量组，分别给予生理盐水、60mg/kg和120mg/kg PNS腹腔注射。8周后，对apoE-/-小鼠胸主动脉进行HE、弹力纤维和β-半乳糖苷酶染色，并在光镜下观察病理形态学改变；流式细胞仪检测骨髓和外周血CD117+/Ly-6+和FLK+/Ly-6+细胞并计数；ELISA方法测定血清和骨髓上清中的MMP-9，SDF-1α和SCF浓度；免疫组织化学方法测定胸主动脉VWF、α-SMA、SDF-1α和CXCR4表达，骨髓SDF-1α和CXCR4表达；Real-time PCR法检测骨髓SDF-1α、CXCR4、PI3K、c-Kit和SCF mRNA表达以及和胸主动脉SDF-1α、CXCR4mRNA表达。

结果1.与模型组相比，60mg/kg和120mg/kg PNS组斑块面积均显著性减少（P<0.05或P<0.01），内膜与中膜比值（P<0.01）显著降低。2.与模型组相比，PNS两个剂量组胸主动脉VWF阳性细胞层的长度显著增加（P<0.01）；内膜α-SMA含量较模型组显著下降（P<0.05或P<0.01）。3.光镜下，模型组胸主动脉弹力纤维层数明显减少，排列疏散，并且有多处断裂现象，而PNS组弹力纤维则排列致密，连续，未发生断裂；与模型组比较，60mg/kg和120mg/kg PNS组胸主动脉β-半乳糖苷酶染色后的蓝色面积明显减少。

参考文献

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