RENCA小鼠肾癌细胞

背景^[1-6]

RENCA小鼠肾癌细胞是不规则没有显著角质化的侵染性鳞状细胞癌。单层培养的细胞间可以观察到带状连接，也注意到有细胞质张力丝。1970年发现支原体污染并去除。肿瘤坏死因子（TNF）α抑制ME-180的生长。这株细胞含有人乳头瘤病毒（HPV）DNA，与HPV-39的同源性高于HPV-18。小鼠肾癌细胞Renca提取于人淋巴结组织，原代冻存。每管含有细胞数>5×10 5cells/ml，此细胞通过vWF/Factor VIII和CD31(P-CAM)免疫荧光染色验证，经测试不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌。

RENCA小鼠肾癌细胞形态：贴壁

细胞活力：95％（Viability by Trypan Blue Exclusion）

细胞检测：细胞不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌

培养条件：RPMI-1640+10%FBS；37℃，5%CO2

传代方法：首次建议1:2-1:3两天换液一次

冻存条件：90%FBS+10%DMSO

Renca小鼠肾癌细胞接种和培养：

1）包被液：用去离水配制0.5%明胶溶液，过滤除菌。

2）培养瓶包被：取2-4个T25培养瓶，每个培养瓶加2－3ml0.5%明胶溶液，摇匀使包被液布满培养瓶底面，置37℃2小时或放置过夜。

3）接种细胞：接种前吸净包被液，按2500－5000个细胞/cm接种细胞（1支5×10个细胞可接种2-4个培养瓶），每瓶加培养液3-5ml,摇匀后置37℃5%CO2培养箱内培养24小时，此时细胞已完全贴壁，更换培养液后继续在37℃5%CO2培养箱内培养。

4）扩大培养：一般每周更换培养液2次，至细胞长至覆盖培养面的70-80%可进行传代或冻存。

注意事项：

①传代培养时注意无菌操作并防止细胞间的交叉污染。所有操作尽量靠近酒精灯火焰。每次*好只进行一种细胞的操作。每种细胞使用一套器材。

②RenCa：小鼠肾癌细胞每天观察细胞形态，掌握好细胞是否健康的标准：健康细胞的形态饱满，折光性好，生长致密时即可传代。

③如发现细胞有污染迹象，应立即采取措施，一般应弃置污染的细胞，如果必须挽救，可加含有抗生素的BBS或培养基反复清洗，随后培养基中加入较大量的抗生素，并经常更换培养基。

应用^[7][8]

RENCA小鼠肾癌细胞可用于抑制剂对小鼠肾癌凋亡的作用及其机制研究：

研究Babl/c小鼠Renca异位肾癌模型经IL-2及COX-2抑制剂NS-398作用的肿瘤生长情况、CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞(Treg)在荷瘤小鼠外周血、脾脏及肿瘤局部中的变化,探讨COX-2抑制剂增强肾癌免疫治疗的作用及机制,为COX-2抑制剂辅助治疗肾癌的临床应用提供实验依据。方法：1.以小鼠Renca细胞株异位接种于Babl/c小鼠,建立小鼠Renca异位肾癌模型。2.随机分成四组,不同组别采取不同给药方法,即A组为IL-2组,B组为NS-398组,C组为IL-2+NS-398组,D组为PBS空白对照组。3.分别在给药第14天及第28天提取各组荷瘤小鼠外周血,用流式细胞术检测Treg的变化。4.切取荷瘤小鼠瘤体及脾脏,运用免疫组化(immunohistochemistry,IH)方法检测小鼠脾脏和肿瘤局部的Treg的变化。

结果：1.小鼠种植瘤体经HE染色病理检查,显微镜下可见大量异型细胞并见核分裂相,肿瘤细胞呈圆形、棱形或不规则形,细胞体积较大,细胞质较少,核大、深染,细胞排列紊乱,可见实体样结构,间质少,呈浸润性生长,周围无包膜结构证实Babl/c小鼠种植瘤体符合异位肾癌特征,可以使用Babl/c小鼠来源的肾癌细胞株(Renca)建立小鼠异位肾癌模型。2.Babl/c小鼠异位肾癌在不同药物处理后肿瘤体积出现明显变化,A组经IL-2治疗后10天内肿瘤体积仍有缓慢增长,16天后瘤体开始减小,减小幅度较大；B组单用NS-398,肿瘤仍在增长,但较对照组增长较慢；C组为联合用药组,肿瘤在第六天出现减小,随后一直持续到实验结束,经多组t检验,与其他组具有统计学差异(P<0.05)。3.COX-2抑制剂能下调荷瘤小鼠外周血、肿瘤及脾脏中Treg的表达,且与IL-2联合有协同作用(P<0.05)。

结论：1.使用Babl/c小鼠来源的Renca细胞建立Babl/c小鼠异位肾癌模型可作为研究小鼠肾癌的肿瘤模型。2.COX-2抑制剂联合IL-2可显著显著抑制荷瘤小鼠异位肾癌的生长。3.COX-2抑制剂能下调荷瘤小鼠外周血、肿瘤及脾脏中Treg的表达,Treg的下调是抑制肾癌生长的机制之一4.IL-2联合使用COX-2抑制剂可以作为Babl/c小鼠异位肾癌免疫治疗的辅助用药。

参考文献

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[8]蔡佳荣.COX-2抑制剂对小鼠肾癌的作用及其机制研究[D].复旦大学,2010.