植物组织直接PCR试剂盒

背景^[1-6]

植物组织直接PCR试剂盒是一款可直接对不同类型植物叶片进行PCR扩增的试剂盒，适应性广、稳定性强。植物组织直接PCR试剂盒采用独特的裂解缓冲液体系，可以快速的裂解多种植物样品并释放出基因组DNA，不需要除去蛋白、RNA或次生代谢产物等，即可将释放出的基因组DNA作为模板直接用于PCR反应。此外，样品使用量少，低至1 mg植物叶片即可进行实验。

植物组织直接PCR试剂盒中提供的2×Plant Master Mix具有很强的扩增兼容性，能直接以待测样品裂解液为模板，进行高效特异性扩增。该试剂为2倍浓缩PCR反应混合液，包含了用于PCR扩增除模板和引物外的所有组分，大大简化操作过程，降低污染几率。

本试剂盒根据不同实验需求提供了两种操作方法。直接法仅需要将一小片植物组织加入PCR反应体系即可；裂解法则是将少量含有植物组织的裂解产物加入PCR反应体系。其中，裂解法适合目的片段较长，扩增难度较大，以及需要对同一样本进行多次PCR扩增的实验。

裂解法：

1.取3-5 mg叶片（直径5-7 mm）组织，置于200μL或1.5 mL离心管中。

2.在离心管中加入50μL Buffer P1，确保裂解液能够完全浸没叶片组织。

3.盖好离心管盖，95℃处理10 min。

4.加入50μL Buffer P2，用微量移液器吹打或者涡旋混匀。

5.所得裂解液可4℃保存（5天）或-20℃长期保存或直接用于PCR扩增。

直接法：

1.在200μL离心管中加入相应的2×Plant Master Mix，再添加对应的引物，并用ddH2O使其稀释1×

2.剪取1-2 mg叶片碎块（直径2-3 mm）加入配置好的1×PCR反应体系。

3.根据优化好的PCR条件（退火温度等）进行PCR反应。

4.琼脂糖凝胶电泳检测结果。

注意事项：

1.本试剂盒只适合于多糖多酚含量低的植物叶片样本，如小麦、水稻、烟草、玉米、大豆、油菜等。不适合多糖多酚含量高的植物样本。

2.建议使用新鲜采取的叶片组织，若为长期冷冻组织，应尽量避免反复冻融，否则会导致模板的降解，影响PCR效率。叶片组织以幼嫩为宜，若为成熟的叶片，避免使用叶片主脉部位组织。

3.电泳检测时，切勿使用含有SDS的Loading Buffer。否则，电泳时会在泳道中出现一大团拖尾亮带，影响实验结果。

4.建议扩增片段长度1 kb以内，以便扩增效率。

5.为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

应用^[7][8]

植物组织直接PCR试剂盒可用于转基因植株鉴定、植物基因分型等。

大豆（Glycine max(L.)Merr.）是世界上最广泛种植的豆科植物，是重要的蛋白质和油料来源。随着人们对蛋白质、脂肪需求量的增加，大豆在国民经济中的地位越来越重要。氮素是植物生长必需的大量元素之一，也是限制植物生长和产量形成的首要因素。大豆一生需要大量的氮素营养。虽然大豆是固氮植物，但其自身所固定的氮不能满足大豆丰产对氮素营养的需求。

在苗期，大豆根瘤的数量少，植株尚不能或很少利用根瘤菌共生固氮供给的氮素，因此在这个时期吸收土壤氮以及施用氮肥显得十分重要。传统上人们通过改良土壤和施用氮肥来改善作物的氮营养状况，但氮肥利用效率较低，可被植物利用的氮在30%~40%左右，土壤中超过40%的氮素通过挥发、淋失、脱氮以及微生物分解等途径流失掉，这对环境造成了极大的污染，同时也造成了巨大的经济损失。因此，提高氮素利用效率十分重要。

培育耐低氮胁迫的大豆品种是提高氮素利用效率的有效途径，利用基因工程手段来培育大豆耐低氮胁迫品种可为此开辟一条新途径。本研究以现代分子生物学和转基因等技术为主导，结合新一代高通量测序技术，系统分析与克隆了大豆中控制氮素吸收、转运、同化和再动员等过程相关的功能基因和转录因子，并进行功能验证，最终以提高大豆氮素利用效率，减少化肥投入、提高大豆产量和改善农业生态环境为目的。

参考文献

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