组织总RNA小量提取试剂盒的操作步骤

背景及概述^[1]

组织总RNA小量提取试剂盒用于动物组织，细胞，老鼠尾巴，石蜡包埋组织基因组DNA提取，硅胶膜纯化技术，限度去除蛋白质，多糖，脂类等杂质，纯度高，整个提取过程无需乙醇沉淀和酚/氯仿抽提。组织总RNA小量提取试剂盒可从多种细胞和组织中快速进行总RNA柱式纯化。小于20分钟的高质量RNA；从单一的提取物中纯化高达1,000微克的RNA；无害组织（酚/氯仿）提取液裂解。使用组织总RNA小量提取试剂盒分离获得的总RNA可用于需要高质量的总RNA的多种下游应用领域。

操作步骤^[1]

1.将组织在液氮中磨碎成粉沫。每20~30mg组织加600ulBufferRL（使用前检查是否加入β-巯基乙醇），组织样本少于20mg加350ulBufferRL。样品体积不超过BufferRL体积的十分之一。

2.样品充分裂解后，室温放置5min，使蛋白核酸复合物完全分离。

3.12000rpm离心2~5min，取上清进行下步操作。

4.加入1倍体积（600ul或350ul）的70%乙醇（无RNase水配制），混匀。

5.将步骤4所得溶液全部加入到已装入收集管（CollectionTube2ml）的吸附柱（SpinColumnCR）中，若一次不能将全部溶液加入吸附柱中，请分两次转入，12000rpm离心1min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱放回收集管中。

6.向吸附柱中加入350μlBufferRD，10000rpm离心15sec，弃废液，将吸附柱重新放回收集管中。

7.配制DNaseI混合液：取52ulDEPC-H₂O，向其中加入8ul10×DNaseIBuffer和20ulDNaseI（1U/ul），混匀，配制成终体积为80ul的DNaseI混合液。

8.向吸附柱中直接加入80ulDNaseI混合液，20~30℃孵育15min。

9.向吸附柱中加入350ulBufferRD，10000rpm离心15sec，弃废液，将吸附柱重新放回收集管中。

10.向吸附柱中加入500ulBufferRW，12000rpm离心1min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱放回收集管中。

11.重复步骤10。

12.12000rpm离心2min，倒掉收集管中的废液。将吸附柱置于室温数分钟，以彻底晾干。

13.将吸附柱置于一个新的无RNase离心管（CollectionTube1.5ml）中，向吸附柱的中间部位悬空加入30~50ulDEPC-H₂O，室温放置1min，12000rpm离心1min，收集RNA溶液，-70℃保存RNA，防止降解。

主要参考资料

[1] 现代医学实验技巧全书·上册