血液总RNA小量提取试剂盒的提纯方法

背景及概述^[1]

血液总RNA小量提取试剂盒从小于1.5ml新鲜或冻藏的抗凝血液样品中纯化1-7ug总RNA。血液经红细胞裂解液(ERL)裂解去除红细胞，加入TRKLysis Buffer裂解白细胞，经70%乙醇调节结合条件，过柱吸附RNA，经过三步快速洗涤去杂质，后RNA溶解于DEPC水中。

提纯方法^[1]

与DNA提取相似，RNA的分离是去除像蛋白质或者脂类一样的其他分子。使用有机溶剂将RNA与这些污染物分开。然而，在处理RNA时有几个方面与DNA不同。多数细胞类型在它们的细胞质中与mRNA并存含有大量的RNA酶，它通常是分析提取的关键。为了阻止无处不在的RNA酶对mRNA的降解，分离必须即刻进行并且细胞裂解物必须尽快置于RNA酶变性的环境中。强变性的异硫氰胍(GTC)可以被使用。新鲜的样品或收集的组织可以被均浆并且大量地溶解在4mol/L的GTC溶液中。随后RNA经CsCl密度梯度离心沉淀并且和不能沉淀的DNA分离。接下来可用不同的方法来进一步纯化RNA。另一种方法，RNA也可以在变性盐溶液(例如4mol/L的氯化锂)中从均浆的组织中抽提。随后，进行酚抽提去除均浆物中的蛋白质，然后用醇沉淀RNA。

特点^[1]

血液总RNA小量提取试剂盒具有下列特点：操作简单快捷，直接使用新鲜的或冷冻的抗凝全血样品，不需要裂解红细胞等任何预处理步骤，整个提取过程只需要十分钟左右，可以全在室温下进行。1）纯度高，OD260/OD280均在2.0左右，得到的RNA可以直接用于RT-PCR和Northern杂交等研究。1）产率一般为2-5μg/mL人血。1）与常用的抗凝剂(包括肝素，EDTA，柠檬酸，草酸)兼容。血液总RNA小量提取试剂盒常温运输，4℃保存，有效期一年。

主要参考资料

[1] 分子生物技术导论