对NB4(NB-4)人急性早幼粒白血病细胞的相关研究

背景及概述^[1]

急性早幼粒细胞白血病(acutepromyelocyticleukemia，APL)是急性髓系白血病中具有独特形态学和细胞遗传学特征的一种类型，临床以严重的出凝血障碍为特征。NB4(NB-4)人急性早幼粒白血病细胞原代冻存，冰冻运输或增殖培养后运送，运送前细胞实验室的神经元培养液中培养2到3天。NB4(NB-4)人急性早幼粒白血病细胞达到约80％的融合后进行低温运输（在凝胶冰盒中）。NB4(NB-4)人急性早幼粒白血病细胞经检测不含支原体、细菌、酵母菌和真菌。

相关研究^[2-4]

有研究探讨南极土壤来源真菌的次级代谢产物HDN-1对NB4(NB-4)人急性早幼粒白血病细胞的增殖抑制，诱导凋亡作用及其机制。采用MTT法检测HDN-1对NB4(NB-4)人急性早幼粒白血病细胞的增殖抑制作用；DNA结合染料Hoechst33324染色，WesternBlot实验，流式细胞仪检测细胞凋亡以及凋亡相关蛋白的变化。结果HDN-1能显著抑制NB4(NB-4)人急性早幼粒白血病细胞的增殖，并呈剂量-时间依赖性；HDN-1作用后，细胞核形态发生明显变化且流式细胞仪分析表明NB4细胞凋亡数量明显增加；HDN-1可引起Caspase-3，8，9激活，bid减少，线粒体中凋亡蛋白Bcl-2，Mcl-1的表达降低，以及γ-H2AX、Parp剪切带增加。但是NB4细胞中融合蛋白PML-RARα的表达不能被HDN-1所抑制。结论HDN-1诱导凋亡是通过Caspase依赖的线粒体途径和死亡受体途径共同介导的，PML-RARα不是Hsp90的客户蛋白，其诱导凋亡机制可能是通过抑制Hsp90的其他蛋白表达进行的。

还有研究探讨柠檬醛诱导NB4(NB-4)人急性早幼粒白血病细胞凋亡的分子机制。用不同浓度的柠檬醛处理NB4(NB-4)人急性早幼粒白血病细胞48h，通过实时荧光定量PCR(qPCR)法检测突变型p53(mtp53)基因和凋亡诱导因子AIF基因的mRNA表达变化。结果柠檬醛实验组与空白对照组比较，mtp53基因表达量减低(P<0.05)；柠檬醛实验组与空白对照组比较，AIF基因表达量增加(P<0.05)；乙醇对照组与空白对照组比较，mtp53和AIF的mRNA表达量无明显差异；随着柠檬醛浓度(5、10、20mg/L)的递增，mtp53mRNA表达量逐渐下降，AIFmRNA的表达量逐渐上升，mtp53、AIF在不同浓度柠檬醛实验组表达量差异有统计学意义(P<0.05)。结论柠檬醛通过下调NB4细胞mtp53的表达，上调AIF的表达诱导NB4细胞凋亡。

有研究探讨二甲双胍对NB4(NB-4)人急性早幼粒白血病细胞增殖与凋亡的影响及其可能的机制。方法：二甲双胍单独或联合多柔比星处理NB4细胞后，采用MTT法检测NB4细胞的增殖，采用流式细胞术检测细胞的凋亡，采用Westernblotting法检测凋亡相关蛋白caspase-9及caspase-3的活化。

结果：二甲双胍可剂量(r=0.952，P<0.01)和时间(r=0.967，P<0.01)依赖性抑制NB4细胞的增殖，处理72h后，其对NB4细胞的IC50值为(6.39±0.37)mmol/L。二甲双胍可增加NB4细胞对多柔比星的化疗敏感性，0.625mmol/L二甲双胍联合0.02μmol/L的多柔比星对NB4细胞的增殖抑制率明显高于单用多柔比星组[(29.84±0.21)%vs(10.68±0.45)%，P<0.05]。5mmol/L二甲双胍处理48h后，NB4细胞的凋亡率明显高于未处理对照组[(43.95±0.29)%vs(7.12±0.29)%，P<0.01]；二甲双胍处理NB4细胞后，凋亡蛋白caspase-3、caspase-9活化片段表达上调。结论：二甲双胍能够有效抑制APL细胞株NB4的增殖、促进其凋亡，并能增强其对多柔比星的化疗敏感性，caspase-3和caspese-9凋亡蛋白可能参与二甲双胍诱导NB4细胞凋亡的过程。

主要参考资料

[1] 急性早幼粒细胞白血病相关融合基因的研究进展

[2] Hsp90抑制剂HDN-1诱导急性早幼粒细胞白血病NB4细胞凋亡的研究

[3] 柠檬醛调控突变型p53基因和AIF基因表达诱导急性早幼粒细胞白血病细胞株NB4凋亡

[4] 二甲双胍对急性早幼粒细胞白血病NB4细胞增殖及凋亡的影响