蛇毒肽的作用

背景及概述^[1][2]

蛇毒肽是毒蛇蛇腺分泌的物质，具有镇痛、止血、抑制血栓形成和抗肿瘤等药理作用，并制成了一些蛇毒制剂应用于临床。但因为蛇毒肽是动物毒物中成分最复杂的一类，每一种蛇毒所含的活性成分，粗略估计至少有20种，主要包括各种毒素、酶以及活性多肽，大部分的活性组分直接进入体内都可能使机体产生严重的毒副作用，例如心脏毒性、神经毒性等，这些毒副作用是限制蛇毒制剂在临床治疗方面应用的主要原因。

随着生物化学、生物物理学和分子生物学等学科的迅速发展，对蛇毒肽的研究层次逐渐从粗毒水平向蛇毒组分分离纯化及其功能研究的水平深入，研究热点也逐渐从研究较为透彻的蛇毒对神经系统、血液系统的作用方面转为抗肿瘤作用及机制方面。目前，蛇毒中分离纯化了多种具有抗肿瘤作用的组分，这些组分主要是一些细胞毒素、磷脂酶A2和解离素。

作用

1. 蛇毒肽具有抗多种肿瘤的作用。

在蛇毒药物剂型研究方面，Badr等研究证明：纳米颗粒传递蛇毒毒液给药能更有效地治疗乳腺癌；沙漠眼镜蛇毒液与硅石纳米颗粒组合给药，通过增加自由基如活性氧(ROS)和氢过氧化物的产生，使乳腺癌细胞生长停滞；且沙漠眼镜蛇毒液无论是单独使用于是与硅石纳米颗粒组合，都可通过增加诱导细胞凋亡的终末剪切酶caspase-8，caspase-9和caspase-3的活性来改变细胞周期，导致乳腺癌细胞生长停滞和促进癌细胞凋亡。

此外，国外研究发现：蛇毒中分离的蛋白不仅对人肿瘤细胞增殖具有显著的抑制作用，而且能抑制肿瘤生长过程中产生的疼痛异常，这与蛇毒肽能抑制多种炎症因子和信号通路有关。以上研究表明，蛇毒肽具有强大的抗肿瘤作用。

2.蛇毒肽与抗炎药物

目前临床使用的抗炎药大都具有明显的不良反应，而蛇毒成分除具有抗炎作用以外，还有显著的抗菌活性，并且多肽药物安全性高，如蝰蛇毒液中的磷脂酶A2成分VIIIa(VRV-PL-VIIIa)具有膜通透性的杀菌能力，对所有人体致病菌株均表现出强效的抗菌活性；此外，一些沙特阿拉伯蛇(蝰蛇、沙漠眼镜蛇等)对耐药细菌表现出明显的抗菌活性，但其作用机制尚未明，这些都可以开发为治疗细菌感染性炎症的药物。

蛇毒活性肽在临床上的应用价值已被人们所重视，尤其是将蛇毒肽开发成抗肿瘤、抗炎、抗血栓、镇痛和降压等新药已成为当今热点。随着分子生物学技术的发展，蛇毒的作用机制也逐渐被阐明。大量研究发现：蛇毒肽成分主要通过调控离子通道、调控细胞增殖与凋亡、调控细胞内信号通路、调控细胞因子表达和与相关活性位点或受体结合等发挥药理作用。

蛇毒肽

应用^[3]

光控靶向蛇毒肽锌纳米制剂，易进入脑组织，并在可见光照射下，可以靶向释放蛇毒肽锌，实现蛇毒肽锌的靶向中枢镇痛作用；通过蛇毒肽与锌配合，形成蛇毒肽锌配合物，增强了蛇毒肽的稳定性；最后通过乳化法制备光控靶向蛇毒肽锌纳米制剂，中药光敏剂位于外层，蛇毒肽锌包在内层，形成的纳米囊结构稳定。其制备方法如下：

(1)将蛇毒肽10g，用30g的pH为4的磷酸缓冲液溶解，加入0.05g醋酸锌，500转/分钟搅拌4小时；加入0.1g蔗糖脂肪酸酯，200转/分钟搅拌2小时，制成囊心溶液；

(2)另取聚乳酸-乙醇酸(Aldrich公司)20g，用乙醇制成质量浓度4％的囊材溶液，加入0.1g的姜黄素和0.4g月桂酸单甘油酯，2000转/分钟搅拌0.5小时，制成混合物溶液；

(3)将囊心溶液滴加到混合物溶液中(滴加速度为80滴/min)，3000转/分钟搅拌1.5小时；过0.5μm微孔滤膜，在60℃和0.01个大气压下滤液减压蒸出溶剂1小时，-50℃冷冻干燥4小时，制得光控靶向蛇毒肽锌纳米制剂34g。

制备^[2]

1、分离纯化

1)蝮蛇粗毒20mg充分溶于500μl超纯水，4℃，5000rpm×5min离心，取上清进样。

2)用直径为5μm，孔径为300的反相硅胶C18颗粒作为固定相充填剂，制成高效液相色谱C18反相制备柱(20×300mm)，以0.1％三氟乙酸+乙腈为流动相，流速为7ml/min，检测波长为210nm，分离温度为20℃，在HPLC层析系统上，在0-80％范围内进行梯度洗脱，洗脱时间为120min。

4)自动收集器根据检测器的吸光度值按峰收集，收集后样品在冷冻干燥机进行冷冻干燥，冻干后在-20℃保存备用。

2、检测纯度：分离得到的组分用直径5μm，孔径300的C18反相分析色谱柱(4.6×250mm)对其纯度进行检测，流动相0.1％三氟乙酸(TFA)+乙腈；流速1ml/min；检测波长210nm，在0-40％的范围内进行梯度洗脱，洗脱时间是40min。

3、分子量测定：采用电喷雾质谱(Electrospray ionization mass spectrum，ESI-MS)测定抗肿瘤蛇毒肽的分子量。分子量为7480Da。

4、采用EDMAN降解法来测定抗肿瘤蛇毒肽N端部份氨基酸序列。抗肿瘤蛇毒肽N-端15个氨基酸序列依次为GEECDCGSPENPCCD(SEQ ID NO.1)。

主要参考资料

[1] 黄世杰. (2015). 治疗心力衰竭的蛇毒肽. 国际药学研究杂志(3), 379-379.

[2] 汤耀光, 陈斌, 梁业玲, 刘丹霞, 李爱华, & 贺艳杰等. (2006). 蛇毒多肽和蝎毒多肽对小鼠肝癌移植瘤的抑制作用和caspase-3表达的影响. 广州医科大学学报, 34(5), 18-21.

[3] 付四海, 冯梅, & 熊燕. (2017). 蛇毒多肽的新药研发进展. 中南大学学报（医学版）, 42(11), 1334-1340.