RNase抑制剂的应用

背景^[1-6]

RNase抑制剂是在人的胎盘中存在一种特异性核糖核酸酶(RNase)抑制剂，其本质是蛋白质，分子量为51,000 Da，等电点pH值为4.7。RNasin能够特异地与RNase以非共价键结合形成复合体从而使RNase失活。RNasin在缓冲液为0-0.5M NaCl，pH5-8的条件下具有活性，pH7.8时活性最高。RNasin能够保护mRNA的完整，有利于提高转录及翻译的效率，同时避免了使用有机化合物抑制剂可能带来的影响。

常用的RNase抑制剂：

1、焦碳酸二乙酯（DEPC）：是一种强烈但不彻底的RNA酶抑制剂，他通过和RNA酶的活性基因团组氨酸的咪唑环结合使蛋白质变性，从而抑制酶的活性。

2、异硫氰酸胍：目前认为是最有效的RNA酶抑制剂，它在裂解组织的同时也使RNA酶失活，它既可破坏细胞结构使核酸从核蛋白中解离出来，又对RNA酶有强烈的变性作用。

3、氧钒核糖核苷复合物：由氧化钒离子和核苷形成的复合物，它和RNA酶结合形式过渡类物质，几乎能完全抑制RNA酶的活性。

4、RNA酶的蛋白质抑制剂（RNasin）：从大鼠肝或人胚盘中提取得来的酸性糖蛋白.Rnasin是RNA酶的一种非竞争性抑制剂，可以和多种RNA酶结合，使其失活。

5、其他：SDS、尿素、硅藻土等对RNA酶也有一定的抑制作用。

RNases抑制剂，是一种大肠杆菌表达的重组蛋白，编码基因来源于人类胎盘素，可以通过非竞争性方式按1:1比例和RNase A、RNase B或RNase C结合，并抑制这三种酶的活性，保护RNA不被这三种酶降解。但RNase Inhibitor不能抑制RNase I、T1、T2、H、U1、U2和CL3的酶活性。主要用于cDNA合成，体外转录，体外翻译，以及mRNA-protein复合物分离纯化等过程中保护RNA不被降解；还可用于特定RNase活性的鉴定等。

应用^[7][8]

RNase抑制剂可用于RNA提取实验中防止RNA降解：

在肾癌BAS基因的表达及肾癌与癌旁组织RNA降解差异研究中抽提肾癌及其癌旁组织的总RNA中发现肾癌癌旁组织的RNA比肾癌组织的RNA更易降解。

为证实这一点并探讨其存在的原因及其与原发性肾癌发生发展的关系，通过测量30对距断流相同时间的肾癌组织与癌旁组织总RNA中28S与18S的比值，发现相同缺血时段肾癌组织的总RNA的28S/18S值明显高于相应的癌旁组织（p<0.05），且同一病肾中肾癌组织与癌旁组织的总RNA<WP=7>的28S/18S值随着距断流时间的延长而逐渐下降，相同时段的肾癌组织的总RNA的28S/18S值明显高于相应癌旁组织的28S/18S值（p<0.01）；癌旁组织的总RNA的28S/18S值于距肾断流40分钟时已接近1，但相应的肾癌组织的总RNA的28S/18S值于距断流90分钟才接近1。

以总RNA的28S为内参照，采用Northern Blot技术研究发现：16对肾癌组织的β肌动蛋白的表达高于相应的癌旁组织，进一步证明肾癌癌旁组织的RNA比肾癌组织的RNA更易降解。

为进一步明确肾癌癌旁组织的RNA比肾癌组织的RNA更易降解的原因，并分析其在肾癌发生发展中的作用。采用EnvisionTMTM法检测了肾癌组织与癌旁组织RNase 1的表达，发现癌旁组织肾小管的RNase 1的表达明显高于肾癌组织（p<0.01），并可见于肾小管管腔内；肾癌RNase 1表达与肾癌患者的年龄、性别、肿瘤的部位、侧别、大小及分期无关(p>0.05)，但与肿瘤的病理类型有关，颗粒细胞癌的RNase 1的表达明显高于透明细胞癌和混合性细胞癌（p<0.01），而透明细胞癌和混合性细胞癌的RNase 1的表达无显著性差异(p>0.05)。

同时应用Northern Blot技术研究18对原发性肾癌病人的肾癌组织与癌旁组织的RNase抑制剂(RI)的表达，发现肾癌组织的RI的表达明显高于相应癌旁组织的RI。786 O、A498肾癌细胞株RI呈高表达。但RI的表达与肾癌患者的年龄、性别、肿瘤的部位、侧别、大小、分期及病理类型无关（p>0.05）。

本研究结果表明：PTP BAS基因表达水平降低在原发性肾癌的发生过程中可能起了一定的作用，可能是肾癌的一个抑癌基因。肾癌癌旁组织的总RNA比相应的肾癌组织的总RNA更易降解，其原因可能是肾癌组织的RNase表达降低及RI表达升高所致的RNase活性降低。肾癌组织的RNase活性降低可能是肾癌出现异常增殖的原因之一。提高肾癌中的RNase活性可能成为治疗肾癌的一种有效方法。

参考文献

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[8]许传亮.肾癌BAS基因的表达及肾癌与癌旁组织RNA降解差异研究[D].第二军医大学,2002.