p53兔单克隆抗体

背景^[1-6]

p53 Rabbit Monoclonal Antibody(p53兔单克隆抗体)是p53作为抗原对兔进行免疫后筛选出只产生的p53抗体的B淋巴细胞，再将B细胞通过细胞融合技术与骨髓瘤杂交然后筛选出只分泌p53抗体的杂交瘤细胞，最后通过层析柱纯化制的高纯度的p53抗体兔单克隆抗体。p53是基因组中最重要的肿瘤抑制因子。它响应于许多基因毒性应激，其激活其转录因子活性，进而通过激活p21 Cip/WAF的表达引起细胞周期停滞。

失去其DNA结合功能的突变型p53干扰天然p53的活性并导致致癌转化。或者，转化可能是由Mdm2/Hdm2（一种对p53特异的泛素连接酶）的过表达引起的，这导致其不稳定。p53的失活通常与NFκB（NFκBp50和NFκBp65）的过度活化同时发生，这两者都用于抑制细胞凋亡。p53抗体克隆DO1特异性识别氨基酸20-25之间人p53蛋白N-末端的表位。

p53是一种肿瘤抑制基因，在各种散发性和家族性癌症中发生突变。并且p53作为核蛋白，介导细胞周期停滞以响应DNA损伤，因此在维持基因组稳定性方面是重要的。最近的结果表明，ATM响应于对SER15的DNA损伤，p53的磷酸化增强，这是一种降低p53阻止细胞生长的能力的突变。p53肿瘤抑制基因编码转录因子，其有助于几种细胞活动，包括细胞凋亡，瞬时生长停滞和持续生长停滞或衰老。

在所有人类癌症的约一半中发现p53基因内的突变。在正常运作的细胞中，MDM2蛋白与p53结合，并通过增加其对26S蛋白体的蛋白水解的易感性来维持p53的低水平。经历应激的细胞丧失了MDM2与p53结合的能力，结果p53水平增加，然后导致细胞周期停滞或细胞凋亡（3和4）。p53诱导的细胞周期停滞或凋亡可以通过几种基因的转录调节来实现，包括细胞周期抑制因子p21，DNA修复基因GADD45和凋亡诱导因子Bax。

应用^[7][8]

p53兔单克隆抗体可用于骨肉瘤细胞凋亡的机制研究：

骨肉瘤因其恶性程度高、转移早,目前临床上治疗多采用手术配合化疗、放疗的综合疗法,但限于手术治疗的致残率高、假体功能差,放化疗毒副反应大,晚期肿瘤容易形成对化疗药物的耐受,极易复发,再次治疗也极为棘手,故而骨肉瘤的远期生存率较低,疗效难如人意,传统疗法的局限使得骨肉瘤的新型疗法如生物治疗、免疫治疗、基因治疗和微生物纯化产物治疗正日益成为研究和临床的焦点与热点。

近年Yamada研究报道由假单孢细菌分泌的含铜细菌氧化还原蛋白Azurin,可以与P53蛋白结合形成复合体,抑制P53降解,从而稳定P53蛋白。它在体外细胞试验和体内荷瘤裸鼠实验中均可诱导P53野生型的单核巨噬细胞、黑色素瘤细胞、乳腺癌细胞凋亡,而在呈现P53突变或缺失的黑色素瘤细胞、乳腺癌细胞中细胞毒性大大降低,其细胞毒性具有明显的P53选择性。尤为关键的是,在恶性黑色素瘤细胞、乳腺癌细胞的裸鼠体内移植瘤瘤块中,野生型Azurin可以促使移植瘤退变,抑制移植瘤瘤块生长,诱导肿瘤细胞凋亡,而裸鼠体内却没有发现明显的毒副作用。

这一发现为活菌产物纯化蛋白Azurin应用于临床肿瘤治疗带来了希望和前景。P53、ROS、线粒体途径在Azurin细胞毒性中的分子机制：Azurin增强p53转录活性↑→p53胞内水平↑→谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)↓→GSH↓→ROS↑→线粒体内膜心磷脂氧化→线粒体膜电位(△Ψm)↓→Bax移位线粒体→细胞色素C、AIF释放进入胞质→激活线粒体途径→caspase活化→骨肉瘤细胞凋亡。

P53基因调控的氧化还原状态失衡(GSH耗竭和ROS增高)在其中尤为关键。此外,通过P53依赖性或者非P53依赖性途径,Azurin与低剂量化疗药物如顺铂(Cisplatin,CDDP)、氨甲喋呤(MTX)、阿霉素(ADM)和异环磷酰胺(IFO)的联合给药具有协同效应,Azurin对上述化疗药物体外骨肉瘤细胞的细胞毒性具有增敏效应,其P53依赖性增敏机制与P53调控的氧化应激密切相关,而其不依赖于P53的增敏机制则与氧自由基水平无关。

参考文献

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[7]Targeting the extrinsic apoptosis pathway in cancer[J].Avi Ashkenazi.Cytokine and Growth Factor Reviews.2008(3)

[8]张跃.P53介导的ROS及线粒体通路在Azurin及其联合化疗药物诱导骨肉瘤细胞凋亡的机制探讨[D].浙江大学,2013.