FITC标记山羊抗兔IgG(H+L)

背景^[1-7]

FITC标记山羊抗兔IgG(H+L)用纯化的兔IgG免疫山羊，然后用亲和纯化柱对获得的抗血清进行纯化，并经过人IgG吸附纯化的优质二抗。对人IgG几乎没有结合能力。该FITC标记山羊抗兔IgG(H+L)片段化兔抗山羊二抗是用胃蛋白酶消化IgG去除Fc部分，剩下两个靠二硫键连接的结合抗原的Fab部分，依然是二价的；FITC标记山羊抗兔IgG(H+L)片段形式的二抗可避免与Protein A/G或与Fc受体的结合，还由于其分子本身比较好，更容易渗透入细胞组织结构内而灵敏度更高。

就种属特异性，该二抗与山羊IgG分子有特异性反应，与其它山羊免疫球蛋白（包括IgM、IgE、IgD、IgA等）的轻链有交叉反应。该二抗与血清内非免疫球蛋白无交叉反应。通过血清吸附处理，其与小鼠、人、兔血清内蛋白（包括免疫球蛋白）的交叉反应降到最低，但可能与除此以外其它种属的免疫球蛋白有交叉反应。

FITC是一种常用的绿色荧光探针。FITC（Fluorescein Isothiocyanate，异硫氰酸荧光素）纯品为黄色或橙黄色结晶粉末，易溶于水和酒精溶剂。FITC分子量为389。4，吸收光波长为490～495nm，发射光波长为520～530nm，呈现明亮的黄绿色荧光。FITC在冷暗干燥处可保存多年，是目前应用最广泛的荧光素。

由于FITC是小分子化合物，每一个抗体可标记几个FITC分子，IgM通常用小分子的荧光素标记，如FITC、Cy3/5、Texas Red等。然而FITC的缺点是淬灭快，因此要和抗淬灭剂一起使用。FITC性质稳定，能与蛋白质结合，是检测组织细胞内蛋白质最常用的荧光探针。它还能标记抗体，可用于免疫组织化学单染或多重染色。FITC荧光二抗主要优点是人眼对黄绿色较为敏感，通常切片标本中的绿色荧光少于红色。缺点是在光照下易淬灭，易受自发荧光影响。

应用^[8][9]

FITC标记山羊抗兔IgG(H+L)可用于模型兔的免疫组化实验：

动脉粥样硬化（Atherosclerosis,AS）是一种多因素引起的疾病,涉及遗传、环境、代谢等诸多因素。许多研究表明炎症在动脉粥样硬化发生、发展和演变过程中起着重要作用。因此,对动脉粥样硬化发病机制的研究及其病变过程的了解,有助于发现新的预防和治疗手段,以阻断和减缓动脉粥样硬化的发展。

目的:（1）探讨在兔高脂血症动脉粥样硬化模型中血流动力学指标的变化,动脉粥样硬化斑块处剪切应力的分布;探讨血流动力学因素在动脉粥样硬化形成过程中的变化规律;（2）从蛋白和基因水平探讨兔高脂血症动脉粥样硬化模型中斑块处趋化因子包括白细胞介素-8（interleukin-8,IL-8）、单核细胞趋化蛋白-1（monocyte chemoattractant protein,MCP-1）和Fractalkine表达的变化规律;（3）探讨在体表达的趋化因子含量与血流动力学因素之间是否存在一定的关系,与血脂指标和动脉粥样硬化进程之间是否存在一定的相关性。

方法:（1）用高脂和免疫损伤相结合的方法制备兔高脂血症动脉粥样硬化模型,根据造模时间分组:4周对照组、4周动脉粥样硬化模型组、8周对照组、8周动脉粥样硬化模型组、12周对照组、12周动脉粥样硬化模型组。（2）用游标卡尺测定颈总动脉血管外径,用电磁流量仪测定颈总动脉血流量,并从对侧颈总动脉插管用生理记录仪测定血压,用流变测定仪测定不同切变率(0.512 S-1、5.96 S-1、51.2 S-1、128.5 S-1)下血液粘度。（3）用计算流体力学（CFD）的方法,数值模拟了动脉粥样硬化模型中颈动脉分叉流场分布。（4）应用免疫组化的方法,检测了动脉粥样硬化模型组主动脉升弓部动脉粥样硬化斑块处IL-8、MCP-1、Fractalkine和其受体CX3CR1的蛋白表达。

参考文献

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