STAT1α家兔单克隆抗体

背景^[1-6]

STAT1 alpha Rabbit Monoclonal Antibody（STAT1α家兔单克隆抗体）是用STAT1抗原对家兔进行免疫后筛选出只产生的STAT1抗体的B淋巴细胞，再将B细胞通过细胞融合技术与骨髓瘤杂交然后筛选出只分泌STAT1抗体的杂交细胞，最后通过层析柱纯化制的高纯度的STAT1抗体兔单克隆抗体。STAT（Signal transducers and activators of transcription）(信号传导及转录激活因子),含有SH2和SH3结构域，可与特定的含磷酸化酪氨酸的肽段结合。

当STAT被磷酸化后，发生聚合成为同源或异源二聚体形式的活化的转录激活因子，进入胞核内与靶基因启动子序列的特定位点结合，促进其转录。已克隆成功4种JAK(JAK13和Tyk2)与7种STAT(STAT1，STAT2，STAT3，STAT4，STAT5a，STAT5b，STAT6)。

STAT1膜受体信号通过各种配体，包括干扰素和生长激素，如EGF，诱导激活JAK激酶，然后导致酪氨酸磷酸化的各种转录因子的统计。Stat1和Stat2 IFN-α和形成的异质二聚体ISGF3转录因子复杂的一部分。虽然早期报告显示Stat3激活通过EGF和il-6,它已经表明,Stat3β似乎都被激活而Stat3α是由表皮生长因子激活的,但不是由il-6。Stat4的最高表达见于睾丸和髓样细胞。IL-12被认为是Stat4的激活因子。Stat5被催乳素和IL-3激活。Stat6参与IL-4激活的信号通路。

STAT1同源二聚体参与Ⅱ型干扰素（Interferon-gamma）引发的信号通路，进入细胞核后会结合到启动子上的干扰素γ激活序列（Interferon-gamma activated sequence，GAS），激活IFN诱导的早期基因表达。在Ⅰ型干扰素（interferon alpha/beta）激活的信号通路，STAT1-STAT2异源二聚体与IRF9（interferon response factor 9）结合形成ISGF3（interferon stimulated gene factor 3）复合物，并结合到启动子的ISRE结合区，诱导下游基因表达。IFNγ是唯一一种II型干扰素，主要由活化的T淋巴细胞和自然杀伤细胞产生，具有抗病毒、免疫监视、免疫调节及抗肿瘤等特性。

IFNγ的生物学活性依赖于细胞内分子信号转导网络的激活，目前JAK-STAT信号转导通路最为广泛研究和认可。首先IFNγ与细胞表面的IFNγ受体(IFNGR1和IFNGR2)相结合，使得胞内与IFNGR2相连JAK2激酶发生自磷酸化，激活的JAK2磷酸化JAK1激酶，接着JAK1磷酸化IFNGR1440位酪氨酸，使其产生STAT1蛋白的锚定位点，被募集的STAT1蛋白701位酪氨酸被磷酸化，目前认为可能是被JAK2介导，同时STAT1Ser727在IFNγ信号转导中也会被磷酸化，活化的STAT1蛋白形成同源二聚体，与受体解聚，进入细胞核内，结合含有gamma激活序列(GAS)的基因启动子，启动IFNγ效应基因的表达，从而发挥其抗病毒生物学活性。

应用^[7][8]

STAT1α家兔单克隆抗体可用于c-Abl通过磷酸化STAT1调控IFNγ应答途径研究：

非受体酪氨酸激酶c-abl基因位于人的第9号染色体，是Abelson小鼠白血病病毒原癌基因v-abl在细胞内的同源基因，编码蛋白分子量约为140kDa。c-Abl定位于多种亚细胞结构中，能够被多种应激信号活化，通过其酪氨酸激酶活性参与调控细胞增殖、骨架重塑、细胞黏附、氧化和DNA损伤应激、细胞凋亡、细胞转化以及细胞迁移等生命活动，发挥重要的生理功能。

首先利用荧光定量PCR验证转录组数据，结果显示c-Abl敲低细胞中免疫蛋白酶体诱导亚基Lmp2和调节亚基PA28α的IFNγ诱导转录水平低于野生型细胞，并且抗原提呈相关转运体Tap1本底转录水平也出现下调。Lmp2和Tap1基因共用一个双向转录启动子，而且两个基因的转录均受到IFNγ调控，因此我们构建Lmp2转录启动子荧光素酶报告系统，突变其中已知转录调控序列，结果显示，c-Abl是通过GAS序列调控Lmp2基因转录。

GAS转录活性由IFNγ经典信号转导通路JAK-STAT1中的关键因子STAT1调控，因此，提示我们c-Abl可能通过调控STAT1蛋白影响IFNγ效应基因表达。利用免疫共沉淀方法证明细胞内源性和过表达c-Abl与STAT1能够形成免疫复合物，GST-pull down和Far Western结果表明c-Abl与STAT1是直接相互作用，而且c-Abl通过其SH2结构域与STAT1C端结合，利用细胞原位检测蛋白质相互作用的技术Duo-Link发现IFNγ能够增强c-Abl与STAT1的相互作用，并且具有IFNγ剂量依赖性。

进一步研究发现，IFNγ诱导c-Abl缺陷细胞中STAT1已知关键氨基酸位点Tyr701和Ser727磷酸化水平显著弱于野生型细胞，这两个位点的磷酸化修饰对于STAT1蛋白的信号转导和转录激活活性至关重要；通过过表达和体外激酶分析证明c-Abl能够特异性磷酸化STAT1，并且质谱数据结果表明c-Abl介导STAT1Tyr701磷酸化；利用JAK2缺陷型细胞和JAK1/2激酶抑制剂证明c-Abl磷酸化STAT1不依赖于JAK激酶，并且c-Abl能够促进STAT1蛋白表达水平，调控其同源二聚体的形成及进入细胞核。

参考文献

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[4]Identification of B cell adaptor for PI3-kinase(BCAP)as an Abl interactor 1-regulated substrate of Abl kinases[J].Masahiro Maruoka,Jun Suzuki,Shigehisa Kawata,Kayo Yoshida,Noriko Hirao,Seiichi Sato,Stephen P.Goff,Tatsuo Takeya,Katsuko Tani,Tomoyuki Shishido.FEBS Letters.2005(14)

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[6]Requirement for Abl Kinases in T Cell Receptor Signaling[J].Patricia A Zipfel,Weiguo Zhang,Marisol Quiroz,Ann Marie Pendergast.Current Biology.2004(14)

[7]The Abl family kinases:Mechanisms of regulation and signaling[J].Ann Marie Pendergast.Advances in Cancer Research.2002

[8]崔艳.c-Abl通过磷酸化STAT1调控IFNγ应答途径[D].中国人民解放军军事医学科学院,2012.