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微量 BCA 蛋白质定量试剂盒的说明书

发布日期:2020/3/15 10:27:56

背景及概述[1]

BCA法是理想的蛋白质定量方法,在碱性环境下蛋白质与Cu2+络合并将Cu2+还原成Cu1+。BCA与Cu1+结合形成稳定的紫蓝色复合物,在562 nm处有的光吸收值并与蛋白质浓度成正比,据此可测定蛋白质浓度。该测定方法灵敏度高,操作简单,试剂及其形成的颜色复合物稳定性俱佳,并且受干扰物质去垢剂等影响小。本试剂盒适用于微量蛋白质浓度的测定。

产品规格[1] 

溶液 A 100ml

溶液 B 100ml

溶液 C 5ml

蛋白标准品 20ml(2mg/ml)

产品保存[1]

 室温保存,一年有效。 

标准品以及工作液的制备[1]

A. 牛血清白蛋白标准品稀释液的制备

B. 微量BCA工作液的制备

1. 使用下列公式计算出所需工作液的总体积:

(标准孔数 +待测样品孔数) × (重复数) × (每个样品孔的工作液体积) = 所需工作液的总体积

例如: 标准的试管测定每个样品需要3个不同的稀释度和2次重复(8个标准孔 + 3个待测样品孔) × (2重复) × (1 ml) = 22 ml BCA工作液 (可以多配到25 ml)。

注意:在试管检测法中,每个样品需要1ml的工作液,在微孔板检测中,每个样品需要150μl的工作液。

2. 配制 BCA 工作液:

先将溶液 A、溶液 B 和溶液 C 按 50:48:2 的比例混合,所得溶液即 BCA 工作液。

比如:5 ml 溶液 A + 4.8 mL 溶液 B +200ul 溶液 C。

注意:试剂C刚加入到试剂A和试剂B中时,会产生浑浊并迅速消失呈清绿色溶液。制备足够体积的工作液以检测相应数量的样品。

使用方法[1]

一:微孔板测定法

1. 吸取150ul的标准品及未知样品分别至微孔板中。

2. 滴加150ul的工作液到每孔中并充分混合30秒。

3. 盖上微孔板并在37°C孵育2小时或60℃放置 1 小时。

4. 微孔板冷却至室温。

5. 10分钟内在酶标仪上测量562nm时的吸光值。注意:冷却至室温后依然会继续显色。但是,在室温时的显色比例已经很低,在10分钟内检测到的吸收值一般都不会有太大影响。

6. 绘制标准曲线,测量样品的浓度。

二:试管测定法

1. 吸取1.0ml的标准品及未知样品分别至对应标记的检测管中。

2. 滴加1.0ml的工作液至每管中并充分混合。

3. 盖上检测管并于60°C水浴孵育1个小时。

4. 所有试管冷却至室温。

5. 10分钟内在分光光度计上测量562nm时的吸光值。注意:冷却至室温后依然会继续显色。但是,在室温时的显色比例已经很低,在10分钟内检测到的吸收值一般都不会有太大影响。

6. 绘制标准曲线,测量样品的浓度。

主要参考资料

[1] 微量 BCA 蛋白质定量试剂盒说明书

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