光甘草定的用途及含量测定

背景及概述^[1]

光甘草定是光果甘草(Glycyrrhiza glabra L.)中的主要黄酮类成分之一，现代药理研究表明，光甘草定具有调节免疫、降血脂、降血糖、类雌激素、抗菌、抗氧化、抗炎等作用。

用途^[1]

光甘草定在细胞色素 P450/NADPH氧化系统中显示出很强的抗自由基氧化作用，能明显抑制体内新陈代谢过程中所产生的自由基，以免受对氧化敏感的生物大分子(低密度脂蛋白LDL,DNA)和细胞壁等被自由基氧化损伤，从而可以防治与自由基氧化有关的某些病理变化，如动脉粥样硬化，细胞衰老等。意大利研究还证实光甘草定有抑制食欲的作用，它能减少脂肪却又不减轻体重。光甘草定在心血管疾病的预防上具有良好的发展前景，在美容界，有着“美白黄金”的称号，足以说明光甘草定在医药、食品和美容领域的重要性。

制备^[1]

光甘草定的在光果甘草中的含量较少，仅有0.1％～0.3％，因此，需要一种从光果甘草中有效分离具有较高纯度的光甘草定的制备方法。专利CN102250107A、CN103360404A、CN105777771A、 CN105294722A及CN104725394A公开了光甘草定的制备方法，但都使用了对环境不友好的有机溶剂，如乙酸乙酯等，易造成环境污染，不适合工业生产。专利CN107383039公开了的光甘草定的制备方法，虽然制备过程中不包括环境不友好的有机溶剂，但制备工艺繁琐，需要经过三个聚酰胺柱和一次硅胶柱，成本过高，不适合大规模生产。因此，亟需一种兼具工艺路线简单、环境友好、成本低、适合工业化生产的高纯度光甘草定的制备方法。

一种光甘草定的制备方法，包括以下步骤：

(1)取粉碎的光果甘草1kg，依次利用10重量份水、8重量份水和8重量份水在80℃下提取三次，每次60min；得到的提取液另做处理，收取得到的光果甘草渣。

(2)取步骤(1)得到的光果甘草渣，依次用10重量份95％v/v 乙醇、8重量份95％v/v乙醇和8重量份95％v/v乙醇在70℃下提取三次，每次2h，过滤，合并得醇提取液。

(3)取步骤(2)得到的醇提取液，减压浓缩回收乙醇，得到 110g提取物A，加入55％v/v乙醇2L，进行超声溶解，过滤得到液体部分，减压浓缩得到醇提取物。

(4)大孔吸附树脂柱层析分离：将步骤(3)得到的醇提取物与 6kg的AB-8(140目)大孔吸附树脂拌样，装柱，以250mL/min的速度进行洗脱(洗脱条件如表1所示)，利用薄层色谱法(展开剂为石油醚：乙酸乙酯＝3：1)收集R为0.3～0.6的洗脱液，收集含有光甘草定的洗脱液B。

表1大孔吸附树脂的洗脱条件

(5)聚酰胺柱层析分离：对洗脱液B进行减压浓缩，得到提取物C，与600g聚酰胺拌样，装柱，以200mL/min的速度进行洗脱(洗脱条件如表2所示)，利用薄层色谱法(展开剂为石油醚：乙酸乙酯＝3：1)收集R为0.3～0.6的洗脱液，得到含有光甘草定的洗脱液。

表2聚酰胺柱层析的洗脱条件

(6)对分离得到含有光甘草定的洗脱液进行减压浓缩，然后将浓缩得到的固体部分溶解在乙醇中，滴加水(加水量与乙醇的体积比为4：6)，使得光甘草定重结晶，得到1.1g纯度为98.5％的光甘草定。

含量测定^[2]

一种香草醛‑硫酸比色法测定光甘草定含量的方法，该方法分为两大步骤，步骤是显色液吸光度值信息的采集过程，第二步骤是光甘草定标准检测溶液浓度‑平均吸光度值的线性回归方程建立过程，该方法所需要时间比高效液相色谱法大大缩短，并且显色液在室温60min内稳定可靠，非常适合大量待测光甘草定含量的集中检测。

为实现上述发明目的，本发明采用如下技术方案：

一种香草醛‑硫酸比色法测定光甘草定含量的方法，该方法主要涉及到：光甘草定的标准品纯度HPLC≥98%，无水甲醇，质量百分比浓度是98%的硫酸，香草醛，恒温水浴锅，比色皿，紫外可见分光光度计；该方法通过B环具有间苯二酚结构且C环C2、C3是单键的光甘草定与香草醛试剂发生反应并在质量百分比浓度是98%的硫酸酸性条件下使反应液显色，再利用紫外可见分光光度计测定显色液在其吸收波长534nm下的吸光度值，从而完成显色液吸光度值信息的采集过程：在所述酸性条件下，显色液的颜色深浅与光甘草定的含量呈显著线性正相关关系，符合朗伯‑比尔定律，从而为光甘草定标准检测溶液浓度‑平均吸光度值的线性回归方程建立奠定了基础，所述线性回归方程为以后待测样品中光甘草定含量的测定提供了定量标准。

主要参考资料

[1] CN201811008398.8 光甘草定的制备方法及由该制备方法得到的光甘草定、化妆品

[2] CN201110230297.7 香草醛-硫酸比色法测定光甘草定含量的方法