UTF1抗体的应用

背景^[1-3]

UTF1抗体是一种可以特异性结合UTF1的人工合成抗体，可以靶向结合人、小鼠、大鼠和猪样品中的UTF1蛋白。UTF1抗体可用于多种科学应用，包括Western Blot、免疫组织化学、免疫细胞化学、免疫沉淀和ELISA。

UTF1基因编码的蛋白质是一种含有亮氨酸拉链的转录共激活因子，可将上游激活因子ATF2与基础转录复合物连接起来。编码的蛋白质与染色质密切相关，是胚胎癌和胚胎干细胞正常分化所必需的。这种蛋白质几乎完全存在于多能细胞中，也可以用作转录抑制因子。

UTF1抗体

UTF1抗体使用步骤（Western Blot）：

1.样本制备

1）融解RIPA裂解液（RIPA裂解液-细胞/组织裂解液缓冲液），混匀。

2）贴壁细胞：去除培养液，用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍。加入150-250μL裂解液的比例加入裂解液。

3）充分裂解后，10000-14000g离心3-5min，取上清，即可进行后续的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。

2.蛋白电泳

1）取出预制胶，将预制胶固定在电泳槽中，内槽加满tris-glycine电泳缓冲液。

2）在室温或不超过37℃的水浴中溶解5XSDS-PAGE上样缓冲液。水浴溶解后立即室温存放。

3）混合蛋白样品和5XSDS-PAGE蛋白上样缓冲液。

4）100℃或沸水浴加热3-5min，以充分变性蛋白，之后冷却至室温备用。

5）上样蛋白，并在1个孔中上样蛋白marker，盖上电泳槽盖，打开电源，电泳至蓝色染料到达胶的底端处附近即可停止电泳。

6）电泳后取出胶板，用刀在侧边硅胶处，沿着两片玻璃缝隙切开硅胶，即可打开玻璃板；取胶时。

3.转膜与封闭

1）将胶浸于预冷的转膜缓冲液中平衡5min。

2）依据胶的大小剪取膜和滤纸6片，放入预冷的转膜缓冲液中平衡10min，如用PVDF膜，需参照说明书，先用纯甲醇浸泡1-2min，再孵育于预冷的转膜缓冲液中。

3）装配转移三明治：海绵/3层滤纸/胶/膜/3层滤纸/海绵，每层放好后，用试管赶尽气泡。

4）将转移槽置于冰浴中，放入三明治，膜靠近阳极，胶靠近阴极，加入转移缓冲液，插上电极，100V，1h（电流约为0.3A）。

5）转膜结束后，切断电源，取出膜。

6）将膜浸没在5mL丽春红染色液中，置于轨道摇床上室温染色5~10min或更长，直待膜上显示出蛋白条带。

7）清洗：取出膜，用蒸馏水，PBS或者其他适当溶液冲洗至背景清晰后拍照，大概冲洗2~3次，每次5min。

8）脱色：将膜放到0.1N NaOH溶液漂洗5min；倒去洗脱液，再重复一次。

9）清洗：再用蒸馏水清洗膜2~3次，每次5min。

10）将膜置于25mL封闭缓冲液中，在室温下孵育1小时。

11）用5mL TBST洗涤三次，每次15min。

4.抗体孵育与检测

1）将膜和一抗（UTF1抗体按照产品应用推荐稀释度）置于10mL一抗稀释缓冲液中在4℃下孵育过夜并不时轻轻晃动。

2）用5mL TBST洗涤三次，每次15min以去除残留的一抗(UTF1抗体)。

3）将膜和二抗（按照产品应用推荐稀释度）置于10mL封闭缓冲液中孵育1-2小时并不时轻轻晃动。

4）用5mL TBST洗涤三次，每次15min。

5）最后一次洗膜的同时，按照ECL超敏试剂盒说明书，新鲜配制发光工作液。

6）用平头镊取出膜，搭在滤纸上沥干洗液。将膜完全浸入发光工作液中，与发光工作液充分接触。室温孵育3min，准备立即压片曝光。但勿洗去发光液。

7）显影曝光。

应用^[4][5]

UTF1抗体可以用于UTF1在乳腺癌的表达与临床意义及其对乳腺癌细胞生物学行为的影响

探讨UTF1蛋白在乳腺癌组织中的表达水平和临床意义及其对乳腺癌细胞生物学行为的影响。

临床资料与方法:收集绍兴市人民医院乳甲外科2009年1月至2011年12月乳腺癌术后组织标本221例,同时整理相关临床信息及随访资料。通过免疫组织化学方法评估肿瘤组织中UTF1的表达,统计分析这些乳腺癌组织中UTF1蛋白的表达与临床意义。构建UTF1过表达的Bcap37稳转细胞株及转染si RNA下调UTF1表达,采用UTF1抗体Western blotting及RT-q PCR检测各组细胞的目的基因表达情况;MTT试验和平板克隆形成试验评价细胞增殖情况;划痕试验和Transwell试验评价细胞侵袭和迁移能力。通过RNA测序技术检测UTF1过表达后的基因组差异并阐述其可能的功能与调控机制。

UTF1抗体结果:发现UTF1表达水平与肿瘤大小显著相关(P=0.004),但与患者年龄、肿瘤组织学分期、淋巴结转移和ER、PR、Her-2、Ki67表达水平均无关。Kaplan-Meier生存分析及COX比例风险模型提示UTF1可显著影响乳腺癌患者的总体生存时间,UTF1高表达的患者的中位生存时间较低表达患者降低,可作为乳腺癌的独立预后因子。随后,对乳腺癌细胞外源性转染UTF1基因,发现转染UTF1后细胞增殖能力及克隆形成能力提高,在划痕实验和transwell实验中UTF1过表达可促进乳腺癌细胞的迁移侵袭能力;而下调UTF1后细胞功能实验结果则刚好相反,表明UTF1对乳腺癌生长起正性调控作用。RNA测序结果显示上调UTF1可影响血管平滑肌收缩和转录辅因子结合等生物学功能及血管内皮生长因子和癌症中的转录调控异常等信号通路。结论:本研究阐述了在乳腺癌的发生发展中,UTF1参与肿瘤进展并显著影响预后,从而为临床治疗提供新的理论基础以及治疗策略。

参考文献

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[5]金书寻.UTF1在乳腺癌的表达与临床意义及其对乳腺癌细胞生物学行为的影响[D].浙江大学,2021.