293/人胚肾细胞的复苏方法

背景及概述^[1]

人胚肾细胞为293细胞插入SV40T-抗原的温度敏感基因后产生的高转染效率的衍生株，可以表达SV40T和EBNA1。

复苏方法^[1]

293/人胚肾细胞复苏方法为：

1）把冻存管从液氮中取出来，立即投入37℃水浴锅中，轻微摇动。液体都融化后（大概1-1.5分钟），拿出来喷点酒精放到超净工作台里。

2）把上述细胞悬液吸到装10ml培养基的15ml的离心管中（用培养基把冻存管洗一遍，把粘在壁上的细胞都洗下来），1000转离心5分钟。

3）把上清液倒掉，加1ml培养基把细胞悬浮起来。吸到装有10ml培养基的10cm培养皿中前后左右轻轻摇动，使培养皿中的细胞均匀分布。

4）标好细胞种类和日期、培养人名字等，放到CO2培养箱中培养，细胞贴壁后换培养基。5）3天换一次培养基。

相关研究^[1]

有实验研究地高辛衍生物对293/人胚肾细胞上延迟整流钾电流（delayedafterpotassiumcurrent，I_K）的影响。应用磷酸钙瞬时转染的方法，将人心肌细胞上的延迟整流钾电流通道蛋白基因（humanEther-a-go-goRelatedGene，HERG）转染进人胚肾细胞，全细胞膜片钳技术记录药物浓度分别为1、10、100nmol·L^-1的地高辛甲、乙两种衍生物对人胚肾细胞上HERG钾通道时间依赖性电流(I_step)和尾电流(I_tail)的影响。

结果显示地高辛衍生物甲和地高辛类似，对HERG钾通道时间依赖性电流和尾电流均呈现剂量依赖性抑制，其半数抑制浓度IC₅₀分别为20.61、22.69nmol·L^-1；未见地高辛衍生物乙对HERG钾通道延迟整流钾电流的抑制作用。结论地高辛衍生物甲对转染HERG钾通道的人胚肾细胞的延迟整流钾电流呈浓度依赖性抑制；而地高辛衍生物乙对转染HERG钾通道的人胚肾细胞的延迟整流钾电流无抑制作用。

主要参考资料

[1] 地高辛衍生物对人胚肾细胞293 延迟整流钾电流的作用