樱花亭的性质介绍

背景及概述^[1-2]

樱花素(樱花亭）5，7-二羟基-4′-苄氧基黄烷酮，最初是由Asahinab从樱花树皮中分离的黄烷酮类物质。日本学者KodamaO，etal(1989年)从稻瘟菌侵染的水稻叶病斑中分离出SA，视为水稻植保素(phytoalexin：PA)。SA对稻瘟菌的孢子萌发(ED₅₀＝15)与菌丝生长(ED₅₀＝5)均有较强的抑制活性。有报导人工合成SA或SA衍生物制备医药或农药。樱花素(樱花亭）主要存在于杨柳科植物毛白杨、山杨的树皮，桦科植物岳桦Betulaermanii的树皮，无患子科植物车桑子Dodonaeaviscose的叶中，为二氢黄酮类化合物。具有抗炎活性，干扰平滑肌细胞的钙代谢而使平滑肌松弛，对小鼠耐药肿瘤细胞表达p-糖蛋白或MＲP1具有有效的调节作用，对哮喘有治疗作用，因其较高的抗氧化活性，能有效对抗黑色素沉积，改善肤色暗沉，起到美白嫩肤的作用，在化妆品市场上备受青睐。目前，樱花素(樱花亭）在国内外市场未见销售，不能进行相关检测。为了满足市场需求，为国内相关机构和企业开展校准、分析评价、仲裁、产品质量控制、实验室认可、能力验证等工作提供准确、及时、可靠、可溯源的技术保障，国家标准化管理委员会批准了樱花素(樱花亭）国家标准样品的研制。同时，作为手性异构体的标准样品示范性研制，得到了质检总局的行业专项资助。

性质^[1]

1）物理性质：熔点为mp151～153℃(甲醇)。旋光度［α］25D=－2.4°(c0.5，甲醇)。分子式C16H1405，理论值为C，67.13%；H，4.90%；测定值为C，67.00%；H，5.01%，测定值与理论值一致。2.2.2UV，IＲUVλmax(甲醇)：288，330nm。IＲ(KBr)解析结果见表1。

2）HＲESI-MSm/z285.0764［M－H］－，与C16H13O5，的理论值(285.0763)一致。

3）NMＲ测定了1H-NMＲ，1H-1HCOSY，13CNMＲ，DEPT，HMQC，HMBC等数据，与文献数据一致。

4）ＲD甲醇/甲苯室温中获得了0.60mm×0.80mm×0.60mm无色针状晶体，经X-单晶衍射测定认为，该晶体属于单斜晶系，空间群为P21/c，晶胞参数为a=12.8531(12)，b=5.7141(3)，c=18.0355(12)，β=97.333(8)°，V=1313.77(16)3，Z=4，Mr=286.27，μ(MoKα)=0.108mm－1，Dc=1.447g·cm－3，F(000)=600，最终的偏离因子为Ｒ=0.0350，wＲ=0.0859，分子内和分子间存在氢键，D构型与L构型通过分子间较强的π-π作用形成了外消旋。结构鉴定表明樱花素(樱花亭）样品的结构为DL-5，4'-二羟基-7-甲氧基二氢黄酮。

应用^[3]

过体外实验证明，樱花素(樱花亭）对犬肾细胞(MDCK)的毒性较低，半数中毒浓度TC50为1709.9mg/L。樱花素(樱花亭）对犬肾细胞感染H5N1病毒具有较明显的抑制作用，半数抑制浓度IC50为10.19，治疗指数TI为(167.8)，明显高于阳性对照组金刚胺烷的TI(11.02)。表明体外樱花素(樱花亭）对H5N1病毒有明显抑制作用，且毒性较低。体内樱花素(樱花亭）对H5N1感染小鼠的治疗结果表明，樱花素(樱花亭）可以延长H5N1病毒感染小鼠的生命率，特别是高、中剂量组，死亡保护率显著高于对照组；H5N1病毒感染可引起小鼠病毒性肺炎，炎性渗出使小鼠肺重量增加，肺指数值的大小可表示肺病变的严重程度。实验中樱花素(樱花亭）各剂量组均可不同程度的降低小鼠肺指数，其中高、中剂量组实验结果与对照组比较差异均有显著性。表明各剂量组对小鼠流感肺炎均有抑制作用，其200mg/kg剂量组对感染小鼠的肺炎抑制率为98.05％，死亡保护率为86.00％，优于阳性对照组金刚胺烷；小鼠的死亡保护率、延长生命率和平均肺指数与病毒对照组比较差异有显著性(P＜0.05)。体外和体内实验结果均表明，樱花素(樱花亭）对H5N1病毒有明显的抑制作用，其作用效果高于阳性对照金刚烷胺，毒性低于金刚烷胺。

制备^[1，3]

方法1：制备取药材4.8kg粉碎，乙醚脱脂，甲醇回流提取物以蒸馏水悬浮，石油醚脱脂后以乙酸乙酯萃取，硅胶柱色谱分离，石油醚-乙酸乙酯(5∶1)洗脱，甲醇重结晶，减压干燥，即得到高纯度的樱花素(樱花亭）2332mg。每瓶5mg密封于2mL棕色玻璃瓶中，共400瓶。

方法2：樱花素(樱花亭）5，7-二羟基-4′-苄氧基黄烷酮生物全合成方法，其合成步骤顺序为：

一、按如下顺序建立非亲和水稻无性细胞系；

(1)通过接种水稻幼穗和种胚筛选出愈伤组织出愈率高的水稻细胞系；

(2)筛选出的水稻细胞系转移到固体继代培养基增殖继代，第二轮筛选出优质无性细胞系；

(3)应用AA培养基逐渐扩大优质无性细胞系液体培养量；

二、按如下顺序进行细胞系樱花素(樱花亭）诱导合成，

(1)选择樱花素(樱花亭）合成诱导子；

(2)将樱花素(樱花亭）合成诱导子投放入步骤二的第(3)步细胞系液体培养液中诱导合成培养不少于72小时，得含樱花素(樱花亭）细胞系粗培养液；

三、水稻无性细胞系诱导合成樱花素(樱花亭）分离纯化，

(1)将含樱花素(樱花亭）诱导合成细胞系粗培养液机械破碎；

(2)加70％甲醇提取，甲醇提取液蒸馏去甲醇，得含樱花素(樱花亭）细胞系培养液提取液；

(3)用乙醇萃取步骤三的第(2)步所得含樱花素(樱花亭）细胞系培养液提取液后，蒸馏去乙醇，浓缩得含诱导合成樱花素(樱花亭）细胞系纯化培养液。

主要参考资料

[1] 樱花素(樱花亭）标准样品的研制

[2] CN200310111564.4樱花素(樱花亭）的生物合成及应用

[3] CN201310111699.4樱花素(樱花亭）及其衍生物用于制备抗H5N1病毒药物的用途