HA抗体(小鼠单抗)

背景^[1-6]

HA抗体(小鼠单抗)是高纯度的小鼠单克隆抗体，属IgG2b同型，免疫原为人工合成的HA标签多肽序列(YPYDVPDYA)。该抗体能高度特异识别重组蛋白C末端、N末端或内部的HA标签(YPYDVPDYA)，适用于定性或定量检测HA融合表达蛋白。

ha标签系统利用一个ha(流感病毒血凝素，influenza hemagglutinin epitope:ypydvpdya)短肽肽融合到目标蛋白。ha标签可位于蛋白质的c端或n端，该系统已广泛应用于多种细胞类型，相应的ha标签抗体也被广泛应用。ha标签抗体能特异识别c末端或n末端带有ha标签(ha-tagged)的融合蛋白，可可以用于检测和ha tag融合表达蛋白的表达、细胞内定位，以及纯化、定性或定量检测ha tag融合表达蛋白等。

HA抗体(小鼠单抗)用经过适当修饰的人工合成human influenza virushemagglutinin(HA)98-106位多肽YPYDVPDYA作为抗原制备而成的抗HA小鼠单克隆抗体。克隆号为HA-7。HA抗体可以用于识别human influenza virus hemagglutinin(HA)，但更为广泛地用于HA tag融合表达蛋白的检测。抗体可以检测位于融合蛋白N-terminal的HA tag，也可检测位于融合蛋白C-terminal的HA tag。DNA重组技术使给目标蛋白带上特定tag成为可能，这些常用的tag包括myc、HA、Flag、His、GST等。带上tag后，通常不会影响目标蛋白的生物活性和细胞内定位。但检测和tag融合表达的目标蛋白时，使用商业化的相应tag抗体就可以完成，大大方便了很多实验检测。

应用^[7][8]

HA抗体可以用于检测和HA tag融合表达蛋白的表达、细胞内定位，以及纯化、定性或定量检测HAtag融合表达蛋白等。

在抗禽流感病毒（AIV）血凝素（HA）单克隆抗体杂交瘤细胞株建立的研究中将低致病性H9N2亚型和H5N2亚型禽流感病毒经著速离心和蔗糖密度梯度离心纯化后，免疫Balb/c小鼠，应用淋巴细胞杂交瘤技术，通过ELISA和HI筛选，建立了抗H5和H9N2亚型禽流感病毒杂交瘤细胞株3E4、2A4，其分泌抗体能力稳定，为针对HA蛋白的单抗，3E4分泌的单克隆抗体能与H5N2亚型N28株发生血凝抑制反应，不与H9N2亚型Hp株发生反应：2A4与H9N2亚A／鸡／河南／A2／99（H9N2）株、A／鸡／淇县／A1／01（H9N2）株、A／鸡／淇县／A1／04（H9N2）株AIV发生血凝抑制反应，而不与H5N2亚型AIV发生反应。

两株单抗与H1N1、H3N2 SIV、NDV、IBDV、EDSV及IBV均无交叉反应，表明该单抗分别具有AIV H5和H9亚型特异性。3E4杂交瘤细胞培养上清和腹水HI效价分别为5、7（log2），ELISA效价分别为6400和12800；2A4杂交瘤细胞培养上清和腹水HI效价为8 log2和16 log2，ELISA效价为12800和256000。这两株杂交瘤细胞分泌的抗体均有良好的热稳定性。腹水经辛酸硫酸铵纯化后，蛋白含量分别7.46mg／mL、14.9 mg／mL。

此两株单克隆抗体的获得为禽流感病毒快速亚型鉴别检测方法的建立，以及研究AIV H5亚型和H9亚型血凝素（HA）抗原性分析、变异规律和变异株的检测等奠定了基础。H9N2亚型AIV表面抗原上的具有血凝活性的抗体结合位点不止一个，3和18毒株的该位点已经变异或缺失。四株单抗分别做病毒中和试验。发现均无中和活性，说明表面抗原上的血凝活性位点并非就是中和活性位点。本试验的研究结果进一步证实了H9N2亚型AIV血凝素抗原的变异特性，将为H9N2亚型AIV血凝素表面抗原结构与功能及变异规律的深入研究以及我国的禽流感H9亚型的流行疫苗株的选择提供了依据。

参考文献

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[8]刘守川.抗禽流感病毒（AIV）血凝素（HA）单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立及应用[D].河南农业大学,2006.