SDS上样缓冲液的作用和配方

蛋白上样缓冲液

蛋白上样缓冲液的主要成分是SDS、甘油、溴酚蓝、TRIS，其中甘油的作用是使样品沉到点样孔中而不漂浮起来，SDS是结合蛋白质，使所有蛋白质所带电荷性质一样，但不同分子量的蛋白结合的SDS数量是不一样的。溴酚蓝是指示剂，可以用来观察大概的电泳过程，因为它在不同浓度的胶中泳动的速率不一样，从而也可以看做是一个蛋白样品，这样就可以直观的大概了解蛋白泳动到了哪个位置，但是只能看一个大概。部分缓冲液加有SDS，SDS主要是促使聚合酶变性，因为没有除尽的聚合酶会结合在DNA双链上影响它的迁移速率。

溴酚蓝（Bromophenol blue）是一种浅黄色到棕黄色粉末；易溶于氢氧化钠溶液，溶于甲醇、乙醇和苯，微溶于水(约0.4g/100ml)，最大吸收波长422nm。是一种pH指示剂，在pH 3.0~4.6范围，颜色由黄变蓝。常用做电泳指示染料，凝胶中电泳迁移速度在小分子核酸或蛋白质区域。

SDS是一种存在于SDS-PAGE样品缓冲液中的去污剂，在其中与少量沸腾物和还原剂（通常是DTT或B-ME一起分解蛋白质-蛋白质二硫键）一起，会破坏SDS-PAGE的三级结构。

SDS还用均匀的负电荷包被蛋白质，从而掩盖了R-基团上的固有电荷。 SDS与线性蛋白质相当均匀地结合（大约1.4g SDS / 1g蛋白质），这意味着蛋白质的电荷现在大约与其分子量成正比。

SDS也存在于凝胶中，以确保蛋白质线性化并掩盖电荷后，在整个运行过程中保持这种状态。

SDS缓冲液的配方

SDS上样缓冲液：取0.063mlpH6.8的Tris-Hcl缓冲液与 5ml的容量瓶中，依次加入 0.1g溴酚蓝 BPB十二烷基环酸钠 SDS、5.0mg和 0.5ml甘油；加入适量去离子水搅拌溶解后，定容至5ml；小份(1ml/份)分装后，在-20℃℃下保存备用。

SDS-PAGE 电泳缓冲液：称取3.02g三羟甲基氨基甲烷(Tris）于1L的容量瓶中，加入18.8g甘氨酸(Glycine)和 1.0gSDS；加去离子水溶解并混合均匀后，定容至1L，室温下保存备用。

SDS-PAGE蛋白上样缓冲液

SDS-PAGE蛋白上样缓冲液(SDS-PAGE Sample Loading Buffer, 5X)，是一种经过改良的以溴酚蓝为染料，5倍浓缩的蛋白上样缓冲液。可以直接用于细胞或组织样品的裂解，并用于后续常规的SDS-PAGE蛋白样品的上样。使用该产品直接裂解蛋白样品的优点是比较便捷；缺点是裂解好的蛋白样品不能用常规的蛋白定量方法测定蛋白浓度。这样蛋白上样量的均一性就较难控制，需要借助考马斯亮蓝等的染色结果或Western的检测结果，来调整上样量。当细胞量或组织用量能控制得比较均一时，使用本裂解液直接裂解获取蛋白样品会比较便捷。本缓冲液已经含有还原剂DTT，有轻微刺激性气味。使用时按照每4微升蛋白样品加入1微升蛋白上样缓冲液(5X)的比例，混合蛋白样品和蛋白上样缓冲液(5X)。100ºC或沸水浴加热3-5分钟，以充分变性蛋白。