EAAT1抗体的应用

背景^[1-3]

EAAT1抗体全称为兴奋性氨基酸转运蛋白1抗体，是一种在神经生物学研究中广泛使用的工具。以下是对EAAT1抗体的详细介绍：

EAAT1抗体

一、基本信息

中文名称：兴奋性氨基酸转运蛋白1抗体

英文名称：Polyclonal Antibody to Excitatory Amino Acid Transporter 1(EAAT1)

别名：EA6、GLAST、GLAST1、SLC1A3、Sodium-dependent glutamate/aspartate transporter 1等

研究领域：神经生物学

二、产品特性

来源：多克隆抗体通常由多种B细胞克隆产生，针对同一抗原的不同表位。EAAT1抗体通常由兔等动物作为宿主制备。

特异性：该抗体能够特异性地识别并结合EAAT1蛋白，从而在免疫组织化学染色、免疫印迹（Western blotting）等实验中发挥作用。

交叉反应：不同来源的EAAT1抗体可能具有不同的交叉反应性，但通常可以识别人、小鼠、大鼠等多种物种的EAAT1蛋白。

三、EAAT1抗体应用

EAAT1抗体在科研实验中具有广泛的应用，主要包括：

Western blotting：用于检测细胞或组织样品中EAAT1蛋白的表达水平。不同供应商提供的抗体建议的工作浓度可能有所不同，但一般在0.5-2μg/mL范围内。

Immunohistochemistry(IHC)：用于组织切片的免疫组化染色，观察EAAT1蛋白在细胞或组织中的定位和表达情况。建议的工作浓度一般在5-20μg/mL范围内。

Immunocytochemistry(ICC)：类似于IHC，但用于培养的细胞或细胞涂片的染色。

四、保存与稳定性

EAAT1抗体通常需要在特定的条件下保存以保持其活性和稳定性。一般建议保存在-20°C以下，避免反复冻融循环。在适当的保存条件下，抗体的保质期可达一年或更长时间。

五、注意事项

在使用EAAT1抗体进行实验前，请仔细阅读产品说明书，了解抗体的特性、应用方法和保存条件等信息。

抗体是一种生物活性物质，容易受到温度、pH值等因素的影响而失活。因此，在使用过程中应注意避免极端条件，并按照说明书的要求进行操作。

不同批次的抗体可能存在一定的差异，因此在更换批次时建议重新验证抗体的特异性和工作浓度等参数。

应用实例^[4][5]

EAAT1抗体可以用于脊髓谷氨酸转运体在小鼠癌痛发病机制中的作用的研究

研究拟在小鼠骨癌痛模型上①通过行为学、放射学、病理学等方法，建立并评价小鼠骨癌痛模型。②通过EAAT1抗体Western Blot方法观察脊髓不同亚型谷氨酸转运体在脊髓的表达，探讨不同亚型的谷氨酸转运体在骨癌痛成因中的作用。③应用非特异性GT激活剂Riluzole，观察对骨癌痛小鼠痛阈的影响，为临床上选择癌痛的治疗药物提供理论依据和新的思路。

实验材料1、实验动物健康雄性C3H／HeJ小鼠，体重20～25g，由上海实验动物中心提供。2、主要试剂和仪器NCTC2472溶骨性纤维肉瘤细胞(ATCC，美国)，NCTC135培养基(Sigma公司，美国)，Riluzole购自美国Superior公司，von Frey纤毛(Stoelting公司，美国)，兔抗EAAT1抗体、羊抗EAAT2抗体、羊抗EAAT3抗体(美国Santa Cruz公司)，小牛抗羊二抗-HRP(美国Santa Cruz公司)，小牛抗兔二抗IgG-HRP(美国Santa Cruz公司)，ECL液(美国Santa Cruz公司)，BME-410A热痛刺激仪(医学科学院生物工程研究所，中国)，微量进样器(上海，中国)，垂直电泳仪(美国Bio-Band公司)，转移槽(美国Bio-Band公司)，低温离心机(日本HITACHI)，酶标仪(日本Shimadazu公司)。

实验方法一、小鼠骨癌痛模型的建立和评价1、动物模型的制备按Schwei等报道的方法建立小鼠骨癌痛模型。肿瘤细胞购自美国ATCC，以NCTC135培养基培养，每周传代1-2次。戊巴比妥钠(50 mg／kg，i．p．)麻醉小鼠后行右膝关节切开术，在股骨内外髁之间穿刺，将含2×10～5个NCTC2472细胞的20μl的最小必需培养基(a-minimal essence media，α-MEM)注入股骨远端骨髓腔中。对照组也行右膝关节切开术，但是不接种肿瘤细胞，即只注入不含有肿瘤细胞的20μl的α-MEM。接种肿瘤细胞后以牙科合金封闭穿刺孔。大量生理盐水冲净切口。术毕小鼠置于22℃恒温，12h明／暗交替的动物房中饲养，自由取食和饮水。2、动物分组40只C3H／HeJ小鼠随机分为2组(n=20)：对照组(Sham组)和癌痛组(Sarcoma组)。分别于注射前、注射后1、3、5、7、10、14、21、28天观察小鼠的体重和痛行为学的变化。痛行为学包括以自发缩足反射次数测量自发痛敏、以von Frey细丝刺激足底测量机械缩足阈值(MWT)、热辐射缩足反射潜伏期(PWL)测量热痛敏以及对小鼠行走时后足的使用进行评分。分别于注射前、注射后7、10、14、21、28天进行X线检查评估股骨破坏程度。28天后取股骨进行组织切片，HE染色光镜下观察肿瘤组织和骨结构破坏情况。3、统计学处理计量资料以均数±标准差((?)±s)表示，应用SPSS 13.0统计软件进行统计分析。组间比较采用t检验。P＜0.05认为差异有统计学意义。

骨癌痛小鼠脊髓不同亚型谷氨酸转运体的表达1、骨癌动物模型的建立同前。2、动物分组35只C3H／HeJ小鼠随机分为2组：假手术组(sham组，n=5)和骨癌痛组(Ca组，n=30)。Ca组分别在右股骨注射肿瘤细胞后1d、3d、7d、10d、14d、21d处死小鼠取同侧腰段脊髓，Sham组直接取腰段脊髓。采用EAAT1抗体Western blot方法分别测定三种不同亚型EAAT1、EAAT2、EAAT3在脊髓的蛋白表达。骨癌痛小鼠脊髓不同亚型谷氨酸转运体的表达1、骨癌痛小鼠脊髓谷氨酸转运体EAAT1蛋白的表达术后第10天骨癌组脊髓EAAT1蛋白含量开始减少，至第14天明显减少，持续降低至术后21天(p＜0.01)。

参考文献

[1]Selecting promising ALS therapies in clinical trials[J].Ying Kuen Cheung;;Paul H.Gordon;;Bruce Levin.Neurology,2006(10)

[2]The glutamate transporter GLAST is involved in spinal nociceptive processing[J].Ellen Niederberger;;Achim Schmidtko;;Ovidiu Coste;;Claudiu Marian;;Corina Ehnert;;Gerd Geisslinger.Biochemical and Biophysical Research Communications,2006(2)

[3]Differential effect of glutamate transporter inhibition on EPSCs in the morphine na?ve and morphine tolerant neonatal spinal cord slice[J].Lisa M.Thomson;;Jinsong Zeng;;Gregory W.Terman.Neuroscience Letters,2006(1)

[4]Alteration in sensitivity of ionotropic glutamate receptors and tachykinin receptors in spinal cord contribute to development and maintenance of nerve injury-evoked neuropathic pain[J].Masakazu Yoshimura;;Norifumi Yonehara.Neuroscience Research,2006(1)

[5]夏小萍.脊髓谷氨酸转运体在小鼠癌痛发病机制中的作用的研究[D].中国医科大学,2007.