小鼠低氧诱导因子1α(HIF1α)ELISA试剂盒的应用

背景^[1-3]

小鼠低氧诱导因子1α(HIF1α)ELISA试剂盒是一种用于科研实验的检测工具，专门用于定量检测小鼠样本中低氧诱导因子1α(HIF1α)的含量。HIF1α是一种转录因子，它在低氧条件下稳定并激活，进而调控一系列与氧平衡相关的基因表达。

小鼠低氧诱导因子1α(HIF1α)ELISA试剂盒

一、产品概述

小鼠低氧诱导因子1α(HIF1α)ELISA试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附实验(ELISA)原理，通过特异性抗体与样本中的HIF1α结合，形成抗原抗体复合物，再与酶标抗体结合，经过洗涤、显色等步骤，最终通过酶标仪测定吸光度来计算样本中HIF1α的浓度。

二、产品特点

高灵敏度：能够检测低浓度的HIF1α，有助于更准确地评估小鼠在低氧环境下的生理反应。

高特异性：试剂盒中的抗体经过严格筛选和验证，确保只与HIF1α特异性结合，减少交叉反应。

重复性好：经过多次实验验证，试剂盒具有良好的重复性，确保实验结果的可靠性。

操作简便：试剂盒附带详细的操作说明书，用户只需按照说明书步骤操作即可完成实验。

三、适用范围

该试剂盒适用于小鼠血清、血浆、细胞培养上清液等样本中低氧诱导因子1α(HIF1α)的定量检测。广泛应用于生命科学、医学等领域的科研实验。

四、保存与运输

保存条件：试剂盒应保存在2-8℃的环境中，避光防潮。避免反复冻融以确保试剂盒的稳定性。

运输方式：一般采用快递运输方式，确保试剂盒在运输过程中的温度和湿度条件符合要求。

五、注意事项

有效期：注意检查试剂盒的有效期，确保在有效期内使用。

操作规范：严格按照说明书上的步骤操作，避免操作失误影响实验结果。

样本处理：正确处理样本，避免样本污染和降解对实验结果的影响。

应用实例^[4][5]

小鼠低氧诱导因子1α(HIF1α)ELISA试剂盒可以用于TAB1介导糖酵解在高糖诱导的骨髓来源巨噬细胞极化中的作用与机制

研究采用高糖刺激小鼠骨髓来源巨噬细胞(bone marrow-derived macrophages,BMMs),并采用si RNA技术敲低BMMs的TAB1,探寻TAB1调控巨噬细胞糖酵解与信号下游分子NF-k B/HIF-1α的关系,以及TAB1/NF-κB/HIF-1α信号通路在DN巨噬细胞极化糖酵解的作用及分子机制,为DN防治提供新策略。

方法1.提取并培养C57BL/6J雄性小鼠BMMs;2.流式细胞术法鉴定BMMs的纯度及成熟度;3.si RNA TAB1转染BMMs,筛选出转染最适条带;4.高糖刺激下不同时间点观察己糖激酶1(Hexokinase 1,HK1),磷酸果糖激酶2(6-phosphofructose-2-kinase,PFKFB3),乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase A,LDHA),TAB1,NF-κB p65和HIF-1α蛋白表达变化;5.分组:甘露醇对照组(D-mannitol),阴性si RNA对照组(control si RNA),空白对照组(control),高糖刺激组(HG),TAB1 si RNA组(TAB1 si RNA),TAB1 si RNA高糖刺激组(TAB1 si RNA+HG),糖酵解抑制剂组(2DG),糖酵解抑制剂+高糖刺激组(2DG+HG)。6.激光共聚焦法观察各组BMMs糖酵解酶HK1,PFKFB3,LDHA及M1型巨噬细胞标志物i NOS的表达变化;7.RT-PCR法检测各组细胞中MCP-1和IL-1βm RNA的表达变化,以及糖酵解酶HK1,PFKFB3和LDHA的m RNA表达变化;8.收集各组细胞上清,用ELISA试剂盒检测炎性细胞因子MCP-1和IL-1β的分泌情况;9.乳酸产生试剂盒及葡糖糖吸收试剂盒检测各组细胞乳酸产生及葡萄糖吸收功能变化;10.Western blot及小鼠低氧诱导因子1α(HIF1α)ELISA试剂盒检测各组细胞HK1,PFKFB3,LDHA,TAB1,NF-κB p65和HIF-1α蛋白表达变化。

小鼠低氧诱导因子1α(HIF1α)ELISA试剂盒结果1.流式细胞术检测实验培养的巨噬细胞,采用F4/80、CD11b双标记鉴定巨噬细胞的纯度及成熟度,结果示双标记成功率为90.6%,满足实验要求。2.激光共聚焦结果显示,与control组相比,HG组HK1,PFKFB3,LDHA和i NOS绿色荧光均明显增强,而TAB1 si RNA组及2DG组上述指标绿色荧光强度无明显差异;与HG组相比,TAB1 si RNA+HG组及2DG+HG组上述指标绿色荧光强度减弱。3.小鼠低氧诱导因子1α(HIF1α)ELISA试剂盒ELISA结果显示,与control组相比,HG组细胞培养基上清液中MCP-1和IL-1β均明显升高(p<0.01),TAB1 si RNA组及2DG组培养基上清液中MCP-1和IL-1β差异无统计学意义;与HG组相比,TAB1 si RNA+HG组及2DG+HG组细胞培养基上清液中MCP-1,IL-6和IL-1β均明显下降(p<0.01)。

参考文献

[1]Adipose tissue macrophages:going off track during obesity.[J].Boutens Lily;;Stienstra Rinke.Diabetologia,2016

[2]Blockade of TGF-β-activated kinase 1 prevents advanced glycation end products-induced inflammatory response in macrophages[J].Xingxin Xu;;Xiangming Qi;;Yunxia Shao;;Yuanyuan Li;;Xin Fu;;Shiyao Feng;;Yonggui Wu.Cytokine,2016

[3]The Regulation and Function of Lactate Dehydrogenase A:Therapeutic Potential in Brain Tumor[J].Cara J.Valvona;;Helen L.Fillmore;;Peter B.Nunn;;Geoffrey J.Pilkington.Brain Pathology,2016(1)

[4]The transcriptional coregulator PGC-1βcontrols mitochondrial function and anti-oxidant defence in skeletal muscles.[J].Gali Ramamoorthy Thanuja;;Laverny Gilles;;Schlagowski Anna-Isabel;;Zoll Joffrey;;Messaddeq Nadia;;Bornert Jean-Marc;;Panza Salvatore;;Ferry Arnaud;;Geny Bernard;;Metzger Daniel.Nature communications,2015

[5]段分分.TAB1介导糖酵解在高糖诱导的骨髓来源巨噬细胞极化中的作用与机制[D].安徽医科大学,2018.