大鼠补体因子H(CFH)ELISA试剂盒的应用

背景^[1-3]

大鼠补体因子H(CFH)ELISA试剂盒是一种用于科研实验的检测工具，主要用于测定大鼠血清、血浆、组织匀浆等相关液体样本中补体因子H(CFH)的含量。以下是关于该试剂盒的详细介绍：

大鼠补体因子H(CFH)ELISA试剂盒

一、基本信息

产品名称：大鼠补体因子H(CFH)ELISA试剂盒

检测方法：酶联免疫法（ELISA）

适应物种：大鼠

样本类型：血清、血浆、组织匀浆、细胞上清液、脑脊液、灌洗液、粪便等相关液体样本

保存条件：2-8℃冷藏，保质期通常为半年

用途：仅供科研使用，不得用于临床诊断

二、产品规格与价格

不同供应商提供的大鼠补体因子H(CFH)ELISA试剂盒规格和价格可能有所不同。例如，有供应商提供48T规格的试剂盒，建议售价为￥1280/盒起；也有供应商提供96T规格的试剂盒，价格可能在￥782至￥1800不等。具体价格请参考各供应商的实际报价。

三、大鼠补体因子H(CFH)ELISA试剂盒检测原理

ELISA试剂盒的检测原理基于抗原与抗体的特异性反应。在大鼠补体因子H(CFH)ELISA试剂盒中，已知浓度的标准品和未知浓度的样品被加入微孔酶标板内，通过一系列反应（如包被、洗涤、加样、加酶标记物、显色等），最终产生与样品中补体因子H(CFH)浓度成正比的颜色。使用酶标仪在特定波长（如450nm）下测定吸光度值，并通过标准曲线计算样品浓度。

四、大鼠补体因子H(CFH)ELISA试剂盒操作步骤

实验开始前，各试剂均应平衡至室温（试剂不能直接在37℃溶解）；试剂或样品稀释时，均需混匀，混匀时尽量避免起泡。实验前应预测样品含量，如样品浓度过高时，应对样品进行稀释，以使稀释后的样品符合试剂盒的检测范围，计算时再乘以相应的稀释倍数。

1.加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100μl，余孔分别加标准品或待测样品100μl，注意不要有气泡，加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，酶标板加上盖或覆膜，37℃反应120分钟。为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。

2.弃去液体，甩干，不用洗涤。每孔加检测溶液A工作液100μl（在使用前一小时内配制），酶标板加上覆膜,37℃反应60分钟。

3.温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分钟，大约400μl/每孔，甩干（也可轻拍将孔内液体拍干）。

4.每孔加检测溶液B工作液（同检测A工作液）100μl，酶标板加上覆膜37℃反应60分钟。

5.温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分钟，350μl/每孔，甩干（也可轻拍将孔内液体拍干）。

6.依序每孔加底物溶液90μl，酶标板加上覆膜37℃避光显色（30分钟内，此时肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度兰色，后3-4孔梯度不明显，即可终止）。

7.依序每孔加终止溶液50μl，终止反应，此时蓝色立转黄色。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。为了保证实验结果的准确性，底物反应时间到后应尽快加入终止液。

8.用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度（OD值）。在加终止液后立即进行检测。

应用^[4][5]

大鼠补体因子H(CFH)ELISA试剂盒可以用于肾上腺髓质素和补体因子H在糖尿病肾病中的作用的研究

通过体外培养实验观察高浓度与低浓度葡萄糖对肾小球系膜细胞TGF-β1以及细胞外基质表达的影响,以及肾上腺體质素和补体因子H对高糖条件下培养的大鼠肾脏系膜细胞TGF-β1以及细胞外基质过度表达的影响,并且使用大鼠补体因子H(CFH)ELISA试剂盒观察应用代文、阿托伐他汀和匹格列酮干预后补体因子H和肾上腺髓质素表达的变化。

方法：肾小球系膜细胞分别培养于低糖（5.6mmol/L）和高糖（30mmol/L）及应用肾上腺髓质素、补体因子H、代文、阿托伐他汀和匹格列酮等不同浓度刺激药物的高糖环境中,分别用大鼠补体因子H(CFH)ELISA试剂盒方法检测细胞上清补体因子H、TGF-β1含量,用RIA方法检测LN和Ⅳ型胶原含量。用RT-PCR方法检测TGF-β1mRNA、AMmRNA以及CfhmRNA的表达情况。用western blot方法检测AM和Cfh蛋白表达的情况。

大鼠补体因子H(CFH)ELISA试剂盒结果1.高糖状态下TGF-β1、LN和Ⅳ型胶原含量明显增加,联合应用肾上腺髓质素和补体因子H能够显著降低高糖状态下培养的肾脏系膜细胞TGF-β1以及细胞外基质LN和Ⅳ型胶原的含量,且在一定范围内呈现出剂量依赖与时间依赖性。2.高糖状态下培养的肾脏系膜细胞分别应用代文、阿托伐他汀和匹格列酮干预后细胞上清TGF-β1、LN和Ⅳ型胶原的含量较高糖对照组明显减低,TGF-β1mRNA,AMmRNA和CfhmRNA的表达亦较高糖对照组显著减低,AM和Cfh的蛋白表达也较高糖对照组显著降低。

参考文献

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[3]Improving oocyte quality by transfer of autologous mitochondria from fully grown oocytes.[J].Kristensen Stine Gry;;Pors Susanne Elisabeth;;Andersen Claus Yding.Human reproduction(Oxford,England),2017

[4]Strategies for Controlled Ovarian Stimulation in the Setting of Ovarian Aging.[J].Ata Baris;;Seli Emre.Seminars in reproductive medicine,2015

[5]耿厚法.肾上腺髓质素和补体因子H在糖尿病肾病中的作用的研究[D].南京医科大学,2005.