人热休克蛋白90(HSP-90)Elisa试剂盒的应用

背景^[1-3]

人热休克蛋白90(HSP-90)Elisa试剂盒是一种用于检测人血清或血浆中热休克蛋白90(HSP-90)水平的生化试剂盒。热休克蛋白90是一种分子伴侣蛋白，参与调节多种细胞功能，包括蛋白质折叠、稳定性和降解等。在生物体内，HSP-90的表达水平受到多种因素的影响，如应激、炎症、肿瘤等。

ELISA试剂盒通过特异性抗体与待测样本中的HSP-90结合，形成抗原-抗体复合物。然后，通过酶标记的二抗与抗原-抗体复合物结合，产生可测量的信号。通过测量信号强度，可以计算出样本中HSP-90的浓度。

人热休克蛋白90(HSP-90)Elisa试剂盒广泛应用于生物医学研究和临床诊断，如肿瘤标志物检测、心血管疾病风险评估、神经退行性疾病研究等。此外，该试剂盒还可用于药物研发和治疗效果评估等领域。

人热休克蛋白90(HSP-90)Elisa试剂盒

人热休克蛋白90（HSP-90）ELISA试剂盒是一种用于检测生物样本中HSP-90蛋白水平的实验室工具。以下是关于该试剂盒的详细介绍：

一、基本信息

名称：人热休克蛋白90（HSP-90）ELISA试剂盒

英文名称：Human Heat Shock Protein 90,HSP-90 ELISA Kit

用途：主要用于科研实验，不得用于临床诊断或决策

保存条件：一般建议保存在2-8℃的环境中，以保持试剂的稳定性和活性

二、产品规格与价格

不同供应商提供的人热休克蛋白90（HSP-90）ELISA试剂盒规格和价格可能有所不同。一般来说，常见的规格包括96孔板和48孔板，价格范围从几百元到数千元不等。具体价格需要根据供应商、订购数量以及市场情况等因素确定。

三、适应物种与样本类型

适应物种：人，部分试剂盒还适用于大鼠、小鼠等其他物种（具体需参考试剂盒说明书）

样本类型：包括血清、血浆、组织匀浆液、细胞培养上清液等多种生物样本类型。具体可检测的样本类型需根据试剂盒说明书确定。

四、检测方法

ELISA（酶联免疫吸附法）是检测人热休克蛋白90（HSP-90）的常用方法。该方法基于抗原与抗体之间的特异性结合反应，通过酶催化底物产生颜色变化来定量或定性检测样本中的HSP-90蛋白水平。

五、操作步骤

实验开始前，各试剂均应平衡至室温（试剂不能直接在37℃溶解）；试剂或样品稀释时，均需混匀，混匀时尽量避免起泡。实验前应预测样品含量，如样品浓度过高时，应对样品进行稀释，以使稀释后的样品符合试剂盒的检测范围，计算时再乘以相应的稀释倍数。

1.加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100μl，余孔分别加标准品或待测样品100μl，注意不要有气泡，加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，酶标板加上盖或覆膜，37℃反应120分钟。为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。

2.弃去液体，甩干，不用洗涤。每孔加检测溶液A工作液100μl（在使用前一小时内配制），酶标板加上覆膜,37℃反应60分钟。

3.温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分钟，大约400μl/每孔，甩干（也可轻拍将孔内液体拍干）。

4.每孔加检测溶液B工作液（同检测A工作液）100μl，酶标板加上覆膜37℃反应60分钟。

5.温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分钟，350μl/每孔，甩干（也可轻拍将孔内液体拍干）。

6.依序每孔加底物溶液90μl，酶标板加上覆膜37℃避光显色（30分钟内，此时肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度兰色，后3-4孔梯度不明显，即可终止）。

7.依序每孔加终止溶液50μl，终止反应，此时蓝色立转黄色。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。为了保证实验结果的准确性，底物反应时间到后应尽快加入终止液。

8.用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度（OD值）。在加终止液后立即进行检测。

应用^[4][5]

人热休克蛋白90(HSP-90)Elisa试剂盒可以用于扇贝免疫相关因子基因的克隆与表达分析

本研究采取大规模的EST测序方法，结合cDNA末端快速扩增技术，直接从cDNA文库中分离、克隆获得了6个免疫防御相关因子基因的全长cDNA序列和6个免疫防御相关因子基因的部分序列。

获得了栉孔扇贝热休克蛋白90的全长cDNA序列和虾夷扇贝热休克蛋白90含3′末端在内的部分序列。栉孔扇贝热休克蛋90分子量为83.04kD，也属于酸性蛋白质。通过InterPro软件分析发现，在该序列中存在热休克蛋白90家族的签名序列，在N末端存在典型的组氨酸激酶样ATPase活性结构域。生物信息学分析表明，获得的序列是热休克蛋白90家族的成员。进一步的空间结构预测分析也表明，它的N端结构域和C端结构域的空间结构与人的热休克蛋白90的空间结构高度相似。采用人热休克蛋白90(HSP-90)Elisa试剂盒和RT-PCR技术研究栉孔扇贝HSP90对于外界应激条件的反应，发现热休克蛋白90对于环境中的胁迫因子PAH有明显的反应，且HSP90 mRNA的表达量与刺激强度有明显的依赖关系。但扇贝HSP90对大肠杆菌刺激的反应不明显。此外，还获得了栉孔扇贝亲环素A、海湾扇贝金属硫蛋白基因的全长cDNA序列，以及栉孔扇贝小热休克蛋白，海湾扇贝肽聚糖识别蛋白，栉孔扇贝超氧化物歧化酶，栉孔扇贝清道夫受体蛋白基因的部分cDNA序列，并且对这些贝类免疫防御相关因子进行了全面的生物信息学分析。

参考文献

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[2]1990 Factors substitution in a human HSP 70 gene promoter:TATA-dependent and independent interactions.Taylor,et al.Mol.Cell.Biol.

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[4]J et al 1994.Several hydrophobic amino acids in the p53 amino-terminal domain of the p53 protein are required for transcrptional activation,binding to mdm-2 and the adenovirus 5 E1B 55 kD protein.Lin J.Genes&Dev.

[5]崔玉坤.1.人hsp90β组成性和丝裂原诱导表达机制的研究2.抑癌基因产物p53对人hsp90β转录调控机制的研究[D].中国协和医科大学,1997.