猪血清的作用

背景^[1-6]

猪血清系采用成年健康猪血液为原料加工而成，经无菌采集、分离、微孔过滤分装而成。无支原体、无噬菌体，内毒素含量低于50EU/ml。

猪血清（无菌过滤）在细胞培养中的作用：

1.提供基本营养物质：氨基酸、维生素、无机物、脂类物质、核酸衍生物等，是细胞生长必须的物质。

2.提供激素和各种生长因子：胰岛素、肾上腺皮质激素（地塞米松）、类固醇激素（雌二醇、睾酮、孕酮）等。生长因子如成纤维细胞生长因子、表皮生长因子、血小板生长因子等。

3.提供结合蛋白：结合蛋白作用是携带重要地低分子量物质，如白蛋白携带维生素、脂肪、以及激素等，转铁蛋白携带铁。结合蛋白在细胞代谢过程中起重要作用。提供促接触和伸展因子使细胞贴壁免受机械损伤。

4.对培养中的细胞起到某些保护作用：有一些细胞，如内皮细胞、骨髓样细胞可以释放蛋白酶，血清中含有抗蛋白酶成分，起到中和作用。这种作用是偶然发现的，现在则有目的的使用血清来终止胰蛋白酶的消化作用。因为胰蛋白酶已经被广泛用于贴壁细胞的消化传代。血清蛋白形成了血清的粘度，可以保护细胞免受机械损伤，特别是在悬浮培养搅拌时，粘度起到重要作用。血清还含有一些微量元素和离子，他们在代谢解毒中起重要作用，如SeO3,硒等。

猪血清（无菌过滤），使用注意事项：

1.血清解冻采用逐步解冻法（-20℃→2—8℃→25℃或37℃），解冻过程中必须随时轻摇，使血清受热温度均匀。

2. 血清凝絮物，血清解冻后会出现少量片状或絮状物析出，这主要是由于血清内不稳定蛋白变性、纤维蛋白析出形成沉淀物，实验证明沉淀物不会影响血清本身质量。;

3. 热灭活本产品除注明外均未灭活。如果必须灭活，请严格按照56℃30分钟（水浴）处理已解冻血清。

4. 常温状态下短期融化并不会影响血清质量。

5.产品有效期，检定合格之日起有效期5年。

解冻血清：将血清从冷冻箱取出后，先置于2-8℃冰箱使之溶解，然后在室温下使之全溶。但必须注意的是，溶解过程中必须规则地摇晃均匀。二、保存血清：血清应保存在-5℃至-2O℃若存放于4℃时，请勿超过一个月。若一次无法用完一瓶，建议将无菌分装血清至恰当的灭菌容器内，再放回冷冻。

猪血清（无菌过滤）注意事项：（1）有少量蛋白质结块析出不影响使用。未融化或融化未经摇匀的血清禁止直接放入高温水浴内加温。减少血清重复冻融。若您一次无法用完一瓶，建议您无菌分装血清至恰当的灭菌容器内，再放回冷冻。（2）长期保存的血清必须储存于-20℃-70℃低温冰箱中。4℃冰箱中保存时间切勿超过1个月。由于血清结冰时体积会增加约10%,因此，血清在冻入低温冰箱前，必须预留一定体积空间，否则易发生污染或玻璃瓶冻裂。（3）一般厂商提供的血清为无菌，无需再过滤除菌。如发现血清有悬浮物，则可将血清加入培养液内一起过滤，切勿直接过滤血清。

应用^[7][8]

猪血清可用于免疫球蛋白提取分离的原料：

免疫球蛋白（Immunoglobulin,Ig）是对抗原刺激应答中,B淋巴细胞产生的能与相应抗原特异性的结合,产生各种免疫效应（生理效应）的一类球蛋白。大量研究报道了口服免疫球蛋白可以有效地预防和治疗婴幼儿由大肠杆菌和轮状病毒引发的肠道疾病。猪血中免疫球蛋白含量很高,其中以G型免疫球蛋白（ImmunoglobulinG,简称IgG）为主。

通过改进的非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳方法测定样品中IgG和其它血清蛋白的含量,从而掌握分离提取工艺对IgG纯度和回收率的影响;利用直接酶联免疫吸附法测定样品中活性IgG的含量,从而了解不同工艺参数对免疫球蛋白活性的影响。根据所得IgG纯度、回收率和活性保留率数据,选择合适的提取方法和工艺参数。建立了实验室分离纯化猪血清IgG的方法。

利用硫酸铵进行初分:室温下,样品pH为7.4,硫酸铵饱和度为37%,此时IgG回收率为80.5%（w/w）,纯度为72.9%（w/w）;用DEAE-纤维素52作进一步纯化,可以得到纯度大于97%（w/w）、活性保留率为94%（w/w）的猪血清IgG。

参考文献

[1]Thermal denaturation of myofibril protein of Antarctic krill and protective effect of sugar.Ooizumi T,Yamamura H,Hashimoto A.Bul.Jpn.Soc.Sci.Fish.1982

[2]IgM in the bovine immune system and its relevance to disease in ruminant immune system.Trainin Z,Ungar-Waron H..1981

[3]Antibodies in human milk against E coli of the serogroups most commonly found in neonatal infections.Karal J,Gotherfors L,Hanson L.A.et al.Acta Paediatrica Scandinavica.1988

[4]Antibodies in human milk against E.coli of the serogroups most commonly found in neonatal infections.Caral J.J,Gotherfors L.,Hanson L.A.et al.Acta.Paediatr.Scand.1988

[5]Immunologic supplementation of cow milk formulations.Goldman A.Bull Int.Dairy Fed.1989

[6]Role of C-terminal region of staphylococcal nuclease for fold ability,stability,and activity.Hirano S,Mihara K,Yamazaki Y.et al.Protein.2002

[7]Stolle et al.Us Patent4732757.1998

[8]罗磊.猪血G型免疫球蛋白的分离提取研究[D].江南大学,2006.