淋巴细胞分离液的应用

背景及概述^[1-2]

造血基质细胞主要存在于骨髓，脐血中是否存在造血基质细胞，能否在体外扩增，有关这些问题目前相关研究报道少。有研究成功分离培养了人脐血源黏附细胞，发现分离培养困难。采用3%明胶联合Ficoll分离MNC，结果细胞的贴壁率及原代培养的成功率都非常低。为此，在前期研究的基础上，需要探索不同明胶浓度及淋巴细胞分离液对人脐血源黏附细胞原代培养的影响，希望能探寻一种合适的分离培养条件，为人脐血源黏附细胞在临床早日应用奠定基础。

分类^[1]

Percoll和Ficol1是目前常用的细胞分离液，其分离血细胞的原理是利用各种细胞密度的差异，将其分离于自上而下的不同液体层次中。Percoll由表面黏附有聚乙烯吡咯酮的胶体硅组成，而Ficol1主要由葡聚糖和泛影酸钠组成。如果需分离的标本量较少，使用细胞分离液能形成较好的MNC层，也方便收集；但如果需要分离的标本量较多，不但分离液使用量大，且离心后部分红细胞仍然可能悬浮在分离液中，致使收集的MNC可能混杂红细胞。此外，界面过大也不利于MNC的收集。明胶溶液可以破坏红细胞表面电荷，加速红细胞沉降，使之与其它细胞分离。3%明胶沉降红细胞的效果虽然，但分离后除MNC外，还含有其它有核细胞，对于仅需要MNC为对象的研究，用该液分离并不能达到预期效果。另外，明胶溶液能否去除脐血中的幼稚红细胞，尚待实验研究证实。因此，目前大多实验和临床应用中采用明胶联合分离液进行血细胞MNC的分离。

应用^[2-3]

应用淋巴细胞分离液纯化大鼠胰岛。有研究建立一种简便、易行和高效的胰岛分离纯化方法，以减少对胰岛细胞的损伤，获得高质量的胰岛组织。选用SD大鼠经胆总管原位灌注胶原酶液，分离消化胰腺组织，用淋巴细胞分离液纯化胰岛细胞。结果：可收获大量的高纯度胰岛，纯度达95%以上，体外葡萄糖刺激实验表明胰岛对刺激反应良好，将胰岛移植于糖尿病小鼠体内可短期纠正其高血糖状态。结论：应用单一密度淋巴细胞分离液纯化大鼠胰岛的方法是一种操作简单、价格低廉、重复性好的大鼠胰岛纯化方法。

淋巴细胞分离液对T细胞阳性花环和非T细胞阳性花环计数结果影响的研究。有研究探讨单克隆抗体SPA红细胞花环法(McAb-A-E法)检验T淋巴细胞亚群时，淋巴细胞分离液对阳性花环细胞计数结果以及非T淋巴细胞阳性花环计数结果的影响。方法选择淋巴细胞分离液法分离的单个核细胞(PBMC)和不加任何物质的抗凝血用自然沉降法分离的混合细胞，用10倍量稀释液洗涤1次。两种细胞用McAb-A-E直接法进行样本对照，并作统计学处理。

结果对20例临床标本用两种不同方法制取单个核细胞悬液的实验对照研究，2组CD3+(t=-4.197，P=0.000)、CD4+(t=-5.177，P=0.000)、CD8+(t=-4.240，P=0.000)、CD4+/CD8+(t=-1.958，P=0.095)进行比较，CD3+、CD4+、CD8+3组结果差异有统计学意义，均为P<0.001。CD4+/CD8+结果比较，差异无统计学意义(P>0.05)；2组非T淋巴细胞阳性花环比较(t=-5.638，P=0.000)，差异有统计学意义(P<0.001)。结论淋巴细胞分离液分离的PBMC细胞，用10倍量的稀释液洗涤1次，细胞表面黏附的黏稠淋巴细胞分离液是无法全部除去的，其对实用McAb-A-E直接法实验的影响是使阳性花环淋巴细胞计数结果偏高，相对的阴性淋巴细胞计数结果偏低。

主要参考资料

[1] 不同明胶浓度及淋巴细胞分离液对人脐血源黏附细胞原代培养的影响

[2] 应用淋巴细胞分离液纯化大鼠胰岛的实验研究

[2] 淋巴细胞分离液对T细胞阳性花环和非T细胞阳性花环计数结果影响的研究