DVL2抗体的应用

背景^[1-3]

DVL2抗体是针对蓬乱蛋白Dsh同源物2（Dishevelled Segment Polarity Protein 2，简称DVL2）的特异性抗体。DVL2是Wnt信号通路中的一个重要蛋白，它通过与frizzled家族成员的胞质C端结合并传递Wnt信号至下游效应因子，参与Wnt信号通路的调控。DVL2抗体可以用于多种科学研究应用，包括Western Blot、免疫组织化学、免疫细胞化学、免疫沉淀和ELISA。

DVL2抗体是用于研究DVL2（Dishevelled 2）蛋白的抗体，它在多种科学研究应用中都有使用，如Western Blot、免疫组织化学、免疫细胞化学、免疫沉淀和ELISA等。不同供应商提供的DVL2抗体在应用和物种反应性方面可能有所不同。

DVL2抗体

以Cell Signaling Technology提供的DVL2抗体为例，其使用步骤如下：

稀释：对于Western Blot，建议将抗体稀释在含有5%BSA、1X TBS（Tris缓冲盐溶液）和0.1%Tween®20的溶液中，并在4°C下温和摇动过夜。

存储：抗体应储存在-20°C，不建议分装。

应用：根据具体实验需求，选择适当的稀释比例和应用方法。

Proteintech提供的DVL2抗体（产品编号12037-1-AP）也适用于Western Blot、免疫组织化学、免疫细胞化学、免疫沉淀和ELISA等多种应用。其推荐的稀释比例如下：

Western Blot：1:1000至1:8000

免疫组织化学和免疫细胞化学：1:50至1:200

免疫沉淀：1:200。

ABclonal提供的Dvl2 Rabbit mAb（产品编号A23686）适用于Western Blot、免疫荧光等。推荐的稀释比例如下：

Western Blot：1:2000至1:10000

免疫荧光/免疫细胞化学：1:50至1:200。

在使用DVL2抗体时，请根据您具体的实验需求和所选抗体的说明书来调整稀释比例和实验步骤。不同抗体可能会有不同的最佳使用条件，因此在实验前仔细阅读抗体的使用说明非常重要。

应用^[4][5]

DVL2抗体可以用于孕期高雄激素暴露导致子代大鼠焦虑、抑郁表型与海马神经发生异常的机制研究

通过建立SD大鼠孕期高雄激素暴露的方法建立子代神经行为学异常的动物模型,用行为学实验检测其是否具有相关行为改变;用免疫荧光检测高雄暴露对大鼠海马齿状回(DG)区域神经发生的影响,且给予慢性氯化锂(lithium)处理研究其对神经行为学异常及神经发生的作用,进一步探索慢性lithium逆转该异常的可能机制,为临床早期干预提供实验依据和理论基础。

方法:SD大鼠分为对照组(CTL组)、高雄激素暴露组(HA组)、氯化锂处理组(LICL组)、高雄激素暴露+氯化锂处理组(HA+LICL组)。HA组和HA+LICL组孕鼠孕期予以皮下注射来曲唑(letrozole)1μg/kg,每天一次(从G0到G20),产后子鼠LICL组及HA+LICL组给予lithium(2mmol/kg)腹腔注射,CTL组和HA组给予等量的生理盐水。并收集孕鼠血清采用ELISA法检测睾酮及雌二醇水平。PND42-56采用强迫游泳装置检测大鼠的抑郁样行为;采用高架十字迷宫装置检测焦虑状态;采用三箱动物社交行为学实验检测社会交往能力;用旷场实验检测大鼠重复刻板样行为。PND56时大鼠连续3天腹腔注射Brdu(100mg/kg),大鼠麻醉后用PBS及4%的多聚甲醛心室灌注,并取其脑组织4℃固定48h。用免疫荧光检测海马齿状回神经发生的变化。双皮质素(Doublecortin,DCX)抗体检测未成熟神经元的变化,用Brdu和成熟神经元特异性核蛋白标志(NeuN)及星形胶质细胞标志(GFAP)抗体检测神经元及星形胶质细胞表型的变化。

DVL2抗体蛋白免疫印迹实验检测海马组织Wnt/β-catenin信号通路成员β-catenin、DVL2、GSK-3β、TCF-4表达变化。结果:HA组及HA+LICL组大鼠与CTL组比较血清睾酮升高(P<0.05);4组雌激素比较无明显差异(P>0.05)。强迫游泳实验结果显示挣扎时间HA组较CTL组明显减少(P<0.05),不动潜伏期差异无统计学意义(P>0.05);高架十字迷宫实验检测发现HA组较CTL组开臂滞留时间及次数均增加,而lithium处理的HA+LICL组较HA组开臂滞留时间及次数减少(P<0.05),接近CTL组水平;旷场实验发现梳理次数HA组低于CTL组(P<0.05),站立次数HA+LiCL组低于HA组(P<0.05);社交行为学实验发现4组大鼠交流时间与玩玩具时间无明显差异(P>0.05)。

DVL2抗体免疫荧光实验结果:孕期高雄激素暴露造成了子代大鼠海马齿状回神经发生障碍。HA组新生DCX阳性神经细胞与CTL组大鼠相比明显降低(P<0.05),而lithium处理促进了神经祖细胞(NPC)的分化(P<0.05),HA+LICL组和CTL组相比差异无统计学意义(P>0.05)。孕期高雄激素暴露同时也造成了NPC增殖的减少(P<0.05),HA组Brdu和NeuN共表达的神经元明显低于CTL组(P<0.05),lithium处理发现同样促进了NPC的增殖(P<0.05),HA+LICL组和CTL组Brdu和NeuN共表达的神经元相比差异无统计学意义(P>0.05)。孕期高雄激素暴露对GFAP和Brdu共表达的星形胶质细胞没有影响。

研究高雄激素对成神经瘤细胞(N2a细胞)增殖凋亡及突触蛋白表达的影响。方法:体外培养小鼠N2a细胞系,letrozole处理24h,lithium干预24h后,采用细胞增殖CCK-8实验检测letrozole及lithium对N2a细胞增殖的影响;流式细胞术检测各组细胞周期和细胞凋亡的变化;用DVL2抗体western blot及原位杂交方法检测Wnt/β-catenin信号通路成员β-catenin、DVL2、GSK-3β、TCF-4表达及letrozole作用靶点酶CYP19A1的表达变化;免疫荧光检测N2a神经元细胞树突标志物MAP2和突触标志物Synaptophysin的表达变化。结果:细胞增殖CCK-8实验检测发现HA组、LICL组、HA+LICL组较Ctr组增殖细胞均增多(P<0.05),且HA+LICL组较HA组更明显(P<0.05)。细胞周期检测显示HA组较CTL组S期延长(P<0.05),HA+LICL组较HA组S期缩短。HA组较CTL组凋亡细胞比例增加(P<0.05),HA+LICL组较HA组无明显变化(P>0.05)。原位杂交及Western blot检测4组β-catenin、DVL2、GSK-3β、TCF-4、CYP19A1无明显差异。

参考文献

[1]Neuronal subset-specific deletion of Pten results in aberrant Wnt signaling and memory impairments[J].Samantha L.Hodges;;Conner D.Reynolds;;Gregory D.Smith;;Taylor S.Jefferson;;Nan Gao;;Jessica B.Morrison;;Jessika White;;Suzanne O.Nolan;;Joaquin N.Lugo.Brain Research,2018

[2]Male rats with same-sex preference show higher immobility in the forced swim test,but similar effects of fluoxetine and desipramine than males that prefer females[J].Alejandra Hernández;;Alonso Fernández-Guasti.Pharmacology,Biochemistry and Behavior,2018

[3]Age,sex,and gonadal hormones differently influence anxiety-and depression-related behavior during puberty in mice[J].Josiah R.Boivin;;David J.Piekarski;;Jessica K.Wahlberg;;Linda Wilbrecht.Psychoneuroendocrinology,2017

[4]The Role of Neural Plasticity in Depression:From Hippocampus to Prefrontal Cortex[J].Wei Liu;;Tongtong Ge;;Yashu Leng;;Zhenxiang Pan;;Jie Fan;;Wei Yang;;Ranji Cui;;Aijun Li.Neural Plasticity,2017

[5]程娟.孕期高雄激素暴露导致子代大鼠焦虑、抑郁表型与海马神经发生异常的机制研究[D].西南医科大学,2019.