大鼠雌二醇受体(ER)Elisa试剂盒的应用

背景^[1-3]

大鼠雌二醇受体(ER)Elisa试剂盒是一种用于检测大鼠血清或组织中雌二醇受体(ER)的浓度的免疫学检测工具。雌二醇受体是一种蛋白质，它能够与雌激素结合，从而调节基因的表达。这种受体在许多生理过程中都起着重要的作用，包括生殖、骨骼健康和心血管健康。

大鼠雌二醇受体(ER)Elisa试剂盒

ELISA试剂盒通常包含以下组分：

酶标记的抗体：这种抗体可以特异性地结合到雌二醇受体上，并通过酶的作用产生可见的颜色反应。

标准品：这是已知浓度的雌二醇受体，用于制作标准曲线，以便在实验中定量样品中的雌二醇受体浓度。

洗涤缓冲液：用于清洗酶标板，去除未结合的物质。

底物：这是一种特殊的化学物质，当酶标记的抗体与雌二醇受体结合时，会产生颜色反应。

终止液：用于停止酶的反应，防止颜色过度发展。

大鼠雌二醇受体(ER)Elisa试剂盒操作步骤：

实验开始前，各试剂均应平衡至室温（试剂不能直接在37℃溶解）；试剂或样品稀释时，均需混匀，混匀时尽量避免起泡。实验前应预测样品含量，如样品浓度过高时，应对样品进行稀释，以使稀释后的样品符合试剂盒的检测范围，计算时再乘以相应的稀释倍数。

1.加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100μl，余孔分别加标准品或待测样品100μl，注意不要有气泡，加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，酶标板加上盖或覆膜，37℃反应120分钟。为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。

2.弃去液体，甩干，不用洗涤。每孔加检测溶液A工作液100μl（在使用前一小时内配制），酶标板加上覆膜,37℃反应60分钟。

3.温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分钟，大约400μl/每孔，甩干（也可轻拍将孔内液体拍干）。

4.每孔加检测溶液B工作液（同检测A工作液）100μl，酶标板加上覆膜37℃反应60分钟。

5.温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分钟，350μl/每孔，甩干（也可轻拍将孔内液体拍干）。

6.依序每孔加底物溶液90μl，酶标板加上覆膜37℃避光显色（30分钟内，此时肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度兰色，后3-4孔梯度不明显，即可终止）。

7.依序每孔加终止溶液50μl，终止反应，此时蓝色立转黄色。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。为了保证实验结果的准确性，底物反应时间到后应尽快加入终止液。

8.用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度（OD值）。在加终止液后立即进行检测。

应用^[4][5]

大鼠雌二醇受体(ER)Elisa试剂盒可以用于雌激素改变对大鼠髁突雌激素受体表达及形态的影响

特发性髁突吸收(idiopathic condylar resorption,ICR),又称原发性性髁突吸收,临床上较少见,主要涉及颞下颌关节(temporomandibular joint,TMJ)大小和形态的改变,以单侧或双侧下颌支高度降低,骨质吸收,下颌后缩,二类错牙合,小下颌面容改变为特征。ICR好发生于年轻女性,病因及发病机制尚不明确,关于雌激素及其受体与ICR关系的相关研究已发现,人和动物的颞下颌关节均存在雌激素受体(estrogen receptor,ER),表明颞下颌关节为雌激素的靶器官,本课题组前期研究证实,灌胃避孕药和制造大鼠卵巢早衰模型均可以诱导大鼠血清雌激素降低,并干扰髁突软骨成骨,诱导髁突出现一定的退行性改变。故推测血清雌激素的变化可能通过ER途径影响并诱导髁突退变吸收。

本研究旨在讨论血清雌激素改变对大鼠髁突软骨形态学改变及α型雌激素受体(Estrogen receptor alpha,ERα)和β型雌激素受体(Estrogen receptor beta,ERβ)表达的影响,探讨雌激素改变在特发性髁突吸收过程中可能的作用及影响,以期为ICR在临床上的治疗和预防提供实验基础及指导。方法将40只6周龄健康未孕雌性SD大鼠随机平均分为对照组、避孕药组、避孕药+盐水组和避孕药+雌二醇组。通过灌胃避孕药(去氧孕烯炔雌醇片)和戊酸雌二醇片2种方法分别建立大鼠血清雌激素降低和升高模型。实验前和第12周、16周分别检测血清雌二醇浓度,实验结束后处死大鼠,取大鼠髁突软骨应用大鼠雌二醇受体(ER)Elisa试剂盒及免疫组织化学法检测ERα、ERβ,苏木精伊红(Hematoxylin Eosin,HE)染色法观察大鼠髁突形态学改变。采用SPSS11.0软件包对数据进行统计分析。

大鼠雌二醇受体(ER)Elisa试剂盒结果1.血清雌二醇浓度检测结果显示:第12周时,与对照组相比,各组血清雌激素浓度均显著降低(P<0.05);第16周时,与避孕药+盐水组相比,避孕药+雌二醇组血清雌二醇浓度显著上升(P<0.05)。2.免疫组化结果显示:各种大鼠髁突软骨中ERα和ERβ均有表达,均主要分布在肥大软骨层。与对照组相比,ERα、ERβ表达均显著降低(P<0.05);与避孕药+盐水组相比,避孕药+雌二醇组ERα表达升高(P<0.05),ERβ表达无明显改变(P>0.05)。3.HE染色结果显示:与对照组相比,避孕药组大鼠髁突软骨发生退行性改变;与避孕药+盐水组相比,避孕药+雌二醇组退变的髁突软骨出现修复改变。结论1.雌激素浓度降低可减少大鼠髁突软骨部位ERα、ERβ表达,调节和介导髁突软骨退变及软骨下骨病理改建过程,最终导致髁突软骨退行性变。2.外源性戊酸雌二醇的使用,可改善大鼠低雌激素水平,增加ERα表达,并可能通过ER途径一定程度上缓解和修复髁突软骨退行性变过程。

参考文献

[1]Effects of estrogen and opioid blockade on blood pressure reactivity to stress in postmenopausal women[J].Allyssa J.Allen;;James A.McCubbin;;James P.Loveless;;Suzanne G.Helfer.Journal of Behavioral Medicine,2014(1)

[2]Effect of estradiol valerate on endometrium thickness during clomiphene citrate‐stimulated ovulation[J].Chonthicha Satirapod;;Siripen Wingprawat;;Rattiya Jultanmas;;Sasivimol Rattanasiri;;Siwanon Jirawatnotai;;Wicharn Choktanasiri.J Obstet Gynaecol Res,2014(1)

[3]Progressive Condylar Resorption:Pathologic Processes and Imaging Considerations[J].David C.Hatcher.Seminars in Orthodontics,2013(2)

[4]Risk Factors in the Initiation of Condylar Resorption[J].G.William Arnett;;Michael J.Gunson.Seminars in Orthodontics,2013(2)

[5]许鹏.雌激素改变对大鼠髁突雌激素受体表达及形态的影响[D].安徽医科大学,2016.