50×TAE 缓冲液的应用
发布日期:2024/8/16 13:32:34
背景[1-3]
50×TAE缓冲液是分子生物学实验中常用的核酸电泳缓冲液,特别是在DNA或RNA的琼脂糖凝胶电泳中发挥着重要作用。50×TAE缓冲液是一种常用于核酸电泳的缓冲系统,由Tris-acetate和EDTA组成。TAE的全称为四羟乙基胺四乙酸,其化学名称为N-[2-羟基-1,2-乙二胺基]-三乙酸,分子式为C10H14N2O8,分子量为290.24。TAE缓冲液主要用于DNA的提取、纯化和检测过程中的电泳分离。
在DNA提取过程中,TAE缓冲液可以有效地稳定DNA,防止其降解。同时,由于其较低的离子强度和较高的pH值(约为8.3),TAE缓冲液可以有效地抑制DNA酶的活性,从而保护DNA免受降解。此外,TAE缓冲液还常用于RNA的提取和纯化过程中的电泳分离。
50×TAE缓冲液
一、基本信息
中文名称:50×TAE缓冲液
英文名称:50×TAE Buffer
主要成分:三羟甲基氨基甲烷(Tris base)、乙酸(acetic acid)、乙二胺四乙酸(EDTA)
作用:在凝胶电泳中维持合适的pH,使溶液具有一定的导电性,以利于DNA或RNA分子的迁移
二、特点与用途
广泛应用:TAE缓冲液是生物学中使用最广泛的核酸电泳缓冲液之一。
迁移率快:双链线状DNA在TAE缓冲液中的迁移率较其他缓冲液快约10%。
分离效果好:电泳大于13kb的DNA片段时,TAE缓冲液能取得更好的分离效果。
回收方便:回收DNA片段时也易用TAE缓冲系统进行电泳。
三、配制方法
50×TAE缓冲液的配制方法如下(以配制1L为例):
称量Tris 242g,Na2EDTA·2H2O 37.2g于1L烧杯中。
向烧杯中加入约600ml去离子水,充分搅拌溶解。
加入57.1ml的冰乙酸,充分搅拌。
加去离子水定容至1L后,室温保存。
四、使用注意事项
稀释使用:50×TAE缓冲液为浓缩液,工作浓度为1×,使用前需用蒸馏水或超纯水稀释50倍。
保存条件:常温运输和保存,有效期一般为12个月。
沉淀处理:若产品出现沉淀析出,可置于37℃水浴中使其溶解,不影响使用。
更换工作液:由于TAE缓冲液的缓冲容量较小,建议及时更换工作液,长时间电泳(如过夜)时不可选用,除非有循环装置使两极的缓冲液得到交换。
应用[4][5]
50×TAE缓冲液可以用于HIV-1新重组株CRF55_01B的T细胞表位变异特征研究
研究通过横断面分析比较CRF55_01B与当前主要流行的CRF01_AE、B、CRF07_BC亚型毒株在病毒Gag、Pol、Nef蛋白的T细胞表位的变异,尤其是已知具有明确保护作用的HLA限制性T细胞表位的变异情况,分析氨基酸变异对病毒复制能力的影响,并明确CRF55_01B亚型病毒二代重组断点与氨基酸多态性及T细胞应答的关系,以此解析CRF55_01B亚型病毒的生物学特点,并为疾病进展评价及免疫治疗奠定基础。
研究方法:1.研究对象本研究选取深圳市2015-2020年基因型耐药检测确定为CRF01_AE、CRF07_BC、CRF55_01B和B亚型病毒的新诊断199例HIV感染者,经Western Blot确认HIV感染,纳入研究时未服用过抗逆转录病毒药物,通过亲和力实验判定为近期感染(6个月内)。收集感染者血浆标本,血浆-80℃冷冻。本项目招募的所有参与者均获得书面知情同意书。2.血浆HIV-RNA提取和gag、pol、nef全长基因巢式PCR扩增根据QIAamp Viral RNAMini Kit试剂盒的说明书从血浆中提取HIV-RNA。采用自行设计引物巢式PCR扩增方法进行gag、pol、nef基因片段扩增。3.PCR产物的鉴定及测序使用50×TAE缓冲液配制1.0%琼脂糖凝胶,根据gag、pol、nef基因片段大小选择2000bp、10000bp DNA ladder作为定量Marker,每孔加5μl的第二轮PCR产物,120V的电压下电泳30 min。在Ultra-Violet Product凝胶分析系统紫外模式下观察有无目的条带。获得目的条带的PCR产物由华大基因公司(中国)直接测序。
参考文献
[1]Adaptation to HLA-associated immune pressure over the course of HIV infection and in circulating HIV-1 strains.[J].Alves Eric;AlKaabi Marwah;Keane Niamh M;Leary Shay;Almeida CoralAnn M;Deshpande Pooja;Currenti Jennifer;Chopra Abha;Smith Rita;Castley Alison;Mallal Simon;Kalams Spyros A;Gaudieri Silvana;John Mina.PLoS pathogens,2022
[2]Adaptation of HIV-1/HIV-2 Chimeras with Defects in Genome Packaging and Viral Replication.[J].Rawson Jonathan M O;Nikolaitchik Olga A;Yoo Jennifer A;Somoulay Xayathed;Brown Matthew A;Mbuntcha Bogni Franck S;Pathak Vinay K;Soheilian Ferri;Slack Ryan L;Sarafianos Stefan G;Hu WeiShau.mBio,2022
[3]Characterization of a Newly Emerging HIV-1 Second-Generation Recombinant Form(CRF126_0107)Among Heterosexuals in Yunnan,China.[J].Xiao Meng;Feng Yue;Gao Li;Yang Cuixian;Liu Jiafa;He Meilan;Li Jianjian;Zhang Mi;Dong Xingqi;Xia Xueshan.The Journal of infection,2022
[4]Epitope length variants balance protective immune responses and viral escape in HIV-1 infection[J].Pymm Phillip;Tenzer Stefan;Wee Edmund;Weimershaus Mirjana;Burgevin Anne;Kollnberger Simon;Gerstoft Jan;Josephs Tracy M.;Ladell Kristin;McLaren James E.;Appay Victor;Price David A.;Fugger Lars;Bell John I.;Schild Hansjörg;van Endert Peter;Harkiolaki Maria;Iversen Astrid K.N..Cell Reports,2022
[5]张楠.HIV-1新重组株CRF55_01B的T细胞表位变异特征研究[D].中国医科大学,2023.
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