荧光原位杂交技术服务

背景^[1-7]

荧光原位杂交技术服务是利用核酸分子单链之间有互补的碱基序列，将有放射性或非放射性的外源核酸（即探针）与组织、细胞或染色体上待测DNA或RNA互补配对，结合成专一的核酸杂交分子，经一定的检测手段将待测核酸在组织、细胞或染色体上的位置显示出来。荧光原位杂交（Fluorescence in situ hybridization,FISH）则是在放射性原位杂交技术的基础上发展起来的一种非放射性分子细胞遗传技术，以荧光标记取代同位素标记的原位杂交方法，是利用荧光标记的DNA探针来检测在细胞、组织和肿瘤的特定DNA序列的强大分子诊断技术。

首先将样本DNA变性，加入特定的荧光标记的探针与变性的样本混合进行杂交，退火得到双链DNA。探针信号能够被荧光显微镜捕获，从而定性、定量地检测目标DNA。与其它用于研究染色体的技术不同，FISH操作灵活，不需要在正在分裂的细胞进行检测，因而能够用来检测或确认基因或染色体是否异常，通常用于遗传咨询，医学和品种鉴定、DNA特定功能研究。

利用FISH方法还可检测非整倍体，微缺失综合征以及基因重排等，这些指标对很多遗传性疾病，如白血病，淋巴瘤，实体瘤，自闭症等发育综合征有重要的临床意义。实验流程：FISH样本的制备→探针的制备→探针标记→杂交→染色体显带→荧光显微镜检测→结果分析。

特点：原位杂交的探针按标记分子类型分为放射性标记和非放射性标记。用同位素标记的放射性探针优势在于对制备样品的要求不高，可以通过延长曝光时间加强信号强度，故较灵敏。缺点是探针不稳定、自显影时间长、放射线的散射使得空间分辨率不高、及同位素操作较繁琐等。采用荧光标记系统则可克服这些不足，这就是FISH技术。

FISH技术作为非放射性检测体系，具有以下优点:1、荧光试剂和探针经济、安全；2、探针稳定，一次标记后可在两年内使用；3、实验周期短、能迅速得到结果、特异性好、定位准确；4、FISH可定位长度在1kb的DNA序列，其灵敏度与放射性探针相当；5、多色FISH通过在同一个核中显示不同的颜色可同时检测多种序列；6、既可以在玻片上显示中期染色体数量或结构的变化，也可以在悬液中显示间期染色体DNA的结构。

应用^[8][9]

荧光原位杂交技术服务可用于检测癌症相关基因位点：

在荧光原位杂交检测乳腺癌HER2基因状态实验中探讨荧光原位杂交(FISH),与免疫组织化学(IHC)染色(3+)和(2+)检测HER2基因状态的结果的一致性、导致两者差异的可能原因及FISH检测HER2基因状态的必要性和可行性。方法采用PathVysionTM探针试剂盒,以FISH方法,对28例IHCEnVision法染色分别为(3+)、(2+)、(1+)和阴性(-)的乳腺癌石蜡切片标本进行HER2基因状态的检测。

结果HER2表达(3+)的12例标本中,10例HER2基因扩增,其中2例为17号染色体多体,另2例无扩增的病例均为多体;IHC为(2+)的10例标本中,7例为HER2基因扩增,其中1例为多体,另3例无扩增病例中2例为多体;IHC为(1+)的3例标本均无HER2基因扩增,其中1例为多体;IHC(-)的3例标本均无基因扩增,其中1例为多体。结论IHC是初步筛查HER2状态的首选方法;因IHC(2+)与FISH检测结果差异较大,所以这类患者应做FISH确诊;IHC(3+)存在假阳性,主要原因可能是由于17号染色体非整倍体,必要时这类患者也应做FISH。

参考文献

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