细胞流式检测服务

背景^[1-6]

细胞流式检测服务是一种在液体系统中，快速测定单个细胞或细胞器的生物、物理和化学特性，并根据这些特性将所需要的细胞或细胞器进行定量分析和分选的技术。它是一种可以快速、准确的检测细胞或者生物学颗粒的多种特性的技术，用来了解细胞群的均值和分布情况，并还可以分选感兴趣的细胞、对该细胞做进一步的培养研究。

传统上，根据胞外或表面表达的标志物不同，流式细胞术可用于鉴定多种细胞汇集池内不同的细胞类型，这种应用通常称为免疫表型分型。然而，这项技术还可轻松地应用于胞内靶标检测，并可成功地应用于复杂信号转导事件的研究。流式细胞术(flow cytometry,FCM)是一项新型的、发展迅速的生物医学分析技术,它是集激光技术、光电测量技术、计算机技术、流体力学以及细胞免疫荧光化学技术、单克隆抗体技术为一体的新型高科技细胞分析技术。

流式细胞仪是应用流式细胞术建立起来的仪器装置。它使细胞或微粒在液流中流动,逐个通过一入射光束,并用高灵敏度检测器记录下散射光及各种荧光信号,从而得以对粒子进行多参数分析,包括诸如粒子形状和大小、细胞周期、细胞内细胞因子、细菌表面抗原、细胞DNA内含物等。FCM检测的粒子一般为活性细胞,通过激光光源激发细胞上所标记的荧光物质的强度和颜色以及散射光的强度可以得到细胞内部各种各样的生物信息。

另外FCM还可进行细胞分选,可以根据所检测细胞的某种性质进行分选,并且如果分选的过程是在无菌条件下进行的,这些细胞还可以用来培养。流式细胞仪的工作原理是使悬浮在液体中分散的经荧光标记的细胞或微粒逐个通过样品池，同时由荧光探测器捕获荧光信号并转换成分别代表前向散射角、侧向散射角和不同荧光强度的电脉冲信号，经计算机处理形成相应的点图，直方图和加三维结构图像进行分析。

检测范围：

细胞结构：细胞大小；细胞颗粒度；细胞表面积；核浆比例；DNA含量与细胞周期；蛋白质含量

细胞功能：细胞表面/胞浆/核的特异性抗原；细胞活性；细胞内外的细胞因子；激素结合位点；细胞受体；蛋白磷酸化；pH值；钙离子浓度；细胞膜电位/线粒体膜电位

用于FCM的样本是单细胞悬液，可以是血液、悬浮细胞培养液、各种体液、新鲜实体瘤的单细胞悬液以及石蜡包埋组织的单细胞悬液等。

服务内容：

1.细胞表面分子的检测与分析;

2.细胞内或细胞核内抗原检测与分析——如胞内细胞因子、调节性T细胞(Treg，CD4+CD25+Foxp3+);

3.细胞凋亡的检测与分析——如PI单染法、Annexin-V-PI复染法、末端转移酶标记技术(TUNEL)、细胞周期特异性细胞凋亡的检测(PI-Annexin-V，PA法);

4.DNA含量检测与细胞周期的分析——如药物对细胞周期的影响、流式细胞核型分析;

5.细胞增殖的检测与分析。

应用^[7][8]

细胞流式检测服务可用于白血病外周血细胞检测对急性白血病复发判断：

将流式细胞术应用于白血病外周血细胞检测对急性白血病患者复发状况的判断效果。对所有实验对象采用流式细胞术进行外周血标本检测,并做好相应的骨髓细胞形态学实验。分析流式细胞术对急性髓系白血病和急性淋巴白血病检验中的特异性和敏感性。结果流式细胞术对急性髓系白血病患者的诊断敏感性为96.00%,特异性为36.00%;流式细胞术对急性淋巴白血病检验的敏感性为79.49%,特异性为41.03%。

所有患者中诊断结果中包括63例阳性和26例阴性患者,阳性复发率为82.54%,阴性复发率为23.08%,结果中可见阳性患者的复发率较阴性患者明显更高,差异显著(P<0.05)。结论将流式细胞术应用于白血病患者外周血细胞检测中,对于急性白血病患者的诊断有较好的敏感性,并且对于患者的复发率进行评估具有积极意义,是一种有效的评估方案,值得在临床上推广使用。

参考文献

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