如何预防核糖核酸酶 A被污染？

在生命科学研究中，RNA的提取和分析是常见且至关重要的环节。然而，RNA极易被核糖核酸酶 A降解，核糖核酸酶 A（RNase）广泛存在且稳定，可耐受多种处理（如煮沸、高压灭菌等）而不被灭活。它催化的反应一般不需要辅助因子，因而RNA制剂中只要存在少量的核糖核酸酶 A就会引起RNA在制备与分析过程中的降解，进而直接影响RNA分析结果。因此，预防核糖核酸酶 A污染成为实验成功的关键。

污染来源

1、实验人员体液、毛发

实验人员的体液中含有丰富的核糖核酸酶 A活性。所以不戴手套会非常容易造成RNase污染，对关键实验造成影响。实验时需要穿着实验服，避免衣物上的某些颗粒物质掉入样品。避免在有气流干扰的实验环境操作。

2、实验耗材（离心管、枪头等）

实验室中枪头和离心管很容易成为被忽视的RNase污染源头。提取RNA时请确保使用经过无RNase检测并具有相关认证的枪头和离心管。高压灭菌过的枪头和离心管无法使RNase全部活性。

3、水源

实验过程中的水和缓冲液也是核糖核酸酶 A污染的常见来源。焦碳酸二乙酯（DEPC）处理是消除水体、缓冲液及其他溶液中RNase污染最为常用的方法。它是一种强烈的RNase抑制剂，其通过和RNase的活性基团组氨酸的咪唑环结合使RNase变性，从而抑制RNase的活性。

4、内源性RNase

所有的组织样品都含有内源性的RNase。内源性RNase含量高的组织：肾脏、肠、脾脏、胸腺、胰腺、贝/虾类的肝胰腺等。组织取样后若不直接提取，则需要用液氮迅速冷冻低温保存，防止样品降解。

预防污染

预防核糖核酸酶 A污染的策略主要包括以下几个方面：

1、实验器具消毒：在RNA提取前，应该彻底清洗和消毒所有使用的实验器具，包括离心管、移液器、试剂瓶等。

2、空间消毒：RNA提取应在干净的实验室环境中进行，避免灰尘和其他微生物的污染。实验室应该定期进行彻底的消毒和清洁。

3、操作人员防护：操作人员应该全副武装，戴手套以避免源自人手的RNA酶污染。

4、使用RNA酶抑制剂：在细胞裂解液中加入RNA酶抑制剂，使破碎细胞与灭活RNA酶同步进行，最大限度地降低细胞破碎过程中所释放的RNA酶的活性。

5、样本保存：组织取样后若不直接提取RNA，要及时用液氮冷冻存于-80°C环境，并尽早进行实验，这样可使RNA的降解达到最少。

6、设立RNase-free区域：选择远离/遮蔽通风孔或开放窗口、走动较少的区域作为RNase-free区域，以减少空气中的核糖核酸酶 A污染。

7、培训人员并建立标准化操作流程：制定详细的RNA实验操作流程和质控标准，以确保实验操作的规范性和准确性。

8、最后针对环境清洁：保持实验室环境的清洁和卫生，定期进行清洁和消毒，以减少细菌和微生物滋生。

以上策略有助于预防核糖核酸酶 A污染，从而保证实验结果的准确性和可靠性。