HDAC7抗体的应用

背景^[1-3]

HDAC7抗体即Histone Deacetylase 7 antibody，是针对组蛋白去乙酰化酶7（HDAC7）的一种特异性抗体。HDAC7（组蛋白去乙酰化酶7）是一种酶，它在细胞中起着调节基因表达的作用，尤其是在染色质结构的调控方面。HDAC7抗体是一种特定的蛋白质，可以用来识别和检测HDAC7酶。这种抗体通常在科学研究领域中使用，特别是在癌症研究、细胞生物学和分子生物学等领域。HDAC7抗体可以用于多种实验技术，如免疫印迹（Western blot）、免疫沉淀（Immunoprecipitation）和免疫组化（Immunohistochemistry）等。

HDAC7抗体

HDAC7抗体制备与来源

制备：HDAC7抗体通常是用经过适当修饰的人工合成HDAC7多肽片段（如aa 137-155或N-terminus的68-103aa）作为抗原制备而成的。

来源：多为进口分装或国内生产，具体来源需根据供应商而定。

HDAC7抗体功能与作用

功能：HDAC7是一种组蛋白去乙酰化酶，主要定位于细胞核，但在细胞质中也有发现。它参与基因转录调控、信号转导、生长发育、分化凋亡、代谢性疾病和肿瘤等多种生理病理过程。

作用：HDAC7抗体可用于检测内源性的HDAC7蛋白，是研究HDAC7在细胞中的功能、定位以及与其他蛋白相互作用的重要工具。

HDAC7抗体使用注意事项

保存条件：HDAC7抗体通常需要保存在-20℃，避免反复冻融。稀释后的抗体应存放在4℃，并尽快使用。

稀释比例：根据实验需求，HDAC7抗体的稀释比例会有所不同。通常，在Western blot中，兔多抗的推荐稀释比例为1:500～2000。

配套试剂：部分供应商会提供Western一抗稀释液等配套试剂，以方便实验操作。

应用^[4][5]

HDAC7抗体可以用于泽布替尼协同Pracinostat通过下调HDAC7/BCL2表达治疗弥漫大B淋巴瘤

探索Pracinostat协同泽布替尼治疗DLBCL作用机制研究。

研究内容与方法:（1）浓度为0、2.5、5、10、20、40、80和160μM的泽布替尼和浓度为0、15.625、31.25、62.5、125、250、500、1000和2000n M的Pracinostat分别处理DLBCL细胞株（包括ABC型DLBCL NU-DUL-1和SU-DHL-2;GCB型DLBCL SU-DHL-6和SU-DHL-10）24小时、48小时和72小时。采用Cell Titer-Glo法检测细胞增殖活力,并计算半数抑制浓度(IC50)。（2）不同浓度的泽布替尼和Pracinostat联合处理DLBCL细胞株48小时,采用Cell Titer-Glo法检测细胞增殖活力,并对比各联合组与单药组经处理后细胞的增殖活力变化。（3）将浓度为0、15.63、31.25、62.5、125、250n M的Pracinostat与浓度为0、5、7.5、10、12.5、15μM的泽布替尼联合处理NU-DUL-1和SU-DHL-6细胞48小时。将浓度为0、15.63、31.25、62.5、125、250n M的Pracinostat分别与浓度为0、5、10、15、20、25μM的泽布替尼联合处理SU-DHL-2细胞48小时;与浓度为0、10、15、20、25、30μM的泽布替尼联合处理SU-DHL-10细胞48小时。采用Cell Titer-Glo法检测细胞增殖活力,使用Synergy Finder选用最高单用药效法（the highest single agent,HSA）模型[1]计算出联合用药的协同指数,大于10表示两种药物之间的相互作用为协同效应。（4）Annexin V-APC/7-AAD（7-氨基放线菌素D）染色流式细胞术检测DLBCL细胞株Control组、泽布替尼组、Pracinostat组和联合组的细胞凋亡情况。HDAC7抗体Western blot检测DLBCL细胞株在Control组、泽布替尼组、Pracinostat组和联合组的细胞中凋亡相关蛋白PARP1、Cleaved-PARP1、Caspase 3、Cleaved-Caspase 3、Caspase 8和Cleaved-Caspase 8的表达情况。（5）碘化丙啶（Propidium iodide,PI）染色流式细胞术检测DLBCL细胞株Control组、泽布替尼组、Pracinostat组和联合组的细胞周期变化。（6）实时荧光定量PCR（Quantitative Real-time PCR,q PCR）检测泽布替尼处理DLBCL细胞株24小时后HDAC7 m RNA表达变化,HDAC7抗体免疫印迹实验（Western blot）检测泽布替尼处理DLBCL细胞株24小时后,HDAC蛋白表达变化。（7）HDAC7抗体Western blot检测Pracinostat处理DLBCL细胞株24小时后,HDAC蛋白表达变化。（8）q PCR检测DLBCL细胞株在Control组、泽布替尼组、Pracinostat组和联合组中HDAC7 m RNA表达量的变化。HDAC7抗体Western blot检测DLBCL细胞株在Control组、泽布替尼组、Pracinostat组和联合组中HDAC7及BCL-2蛋白表达量的变化。（9）在Balb/c裸鼠皮下建立人源ABC-DLBCL细胞株NU-DUL-1异种移植模型验证泽布替尼与Pracinostat在体内发挥联合抗肿瘤作用。（10）对肿瘤组织进行免疫组织化学（Immunohistochemistry,IHC）染色,观察Control组、泽布替尼组、Pracinostat组和联合组中细胞增殖核抗原Ki-67变化;对肿瘤组织进行免疫荧光染色,观察各组凋亡TUNEL染色情况变化。

HDAC7抗体结果:（1）泽布替尼与Pracinostat对DLBCL细胞株NU-DUL-1、SU-DHL-2、SU-DHL-6、SU-DHL-10有体外抑制作用,且有明显的时间和剂量依赖性。（2）泽布替尼可以有效增强Pracinostat对DLBCL细胞株的增殖抑制作用。（3）不同浓度梯度的泽布替尼和Pracinostat联合处理DLBCL细胞株48小时后,计算两药在DLBCL细胞株中的SHA协同指数,在NU-DUL-1细胞中为19.553,在SU-DHL-2细胞中为9.187,在SU-DHL-6细胞中为19.392,在SU-DHL-6细胞中为23.894.（4）泽布替尼和Pracinostat处理DLBCL细胞株48小时后,流式细胞术凋亡检测相较Control组凋亡细胞比例增加;泽布替尼和Pracinostat联合组,凋亡细胞比例明显比单药组增加（P<0.05）。HDAC7抗体Western blot检测表明DLBCL细胞株在单药组中凋亡蛋白表达量相较Control组增加,联合组凋亡蛋白表达量相较单药组增加。（5）泽布替尼和Pracinostat处理DLBCL细胞株48小时,流式细胞术周期检测结果表明泽布替尼组和Pracinostat组G0/G1期细胞比例相较Control组增加;联合组处理细胞株48小时后,G0/G1期细胞比例明显增加,S期细胞比例明显降低。（6）q PCR检测结果显示,泽布替尼和Pracinostat可抑制DLBCL细胞株中HDAC7m RNA的表达量。HDAC7抗体Western blot检测结果显示,泽布替尼和Pracinostat可抑制DLBCL细胞株中HDAC7蛋白的表达量。（7）HDAC7抗体Western blot检测结果显示,Pracinostat可抑制DLBCL细胞株中HDAC7蛋白的表达量。（8）q PCR检测结果显示,DLBCL细胞株在单药组中HDAC7的m RNA表达量相较Control组降低;联合组中HDAC7 m RNA表达量相较单药组降低。Western blot检结果显示,DLBCL细胞株在单药组中HDAC7和BCL-2蛋白表达量相较Control组降低;联合组中HDAC7和BCL-2蛋白表达量相较单药组降低.

参考文献

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[2]Safety and efficacy of pracinostat in combination with gemtuzumab ozogamicin(PraGO)in patients with relapsed/refractory acute myeloid leukemia[J].Abedin Sameem M.;Badar Talha;Gauger Katelyn;Michaelis Laura C.;Runaas Lyndsey;Carlson Karen-Sue;Murthy GS Guru;Atallah Ehab.Leukemia Research,2022

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