HANKS' 平衡盐溶液,不含钙镁的应用

背景^[1-3]

HANKS'平衡盐溶液,不含钙镁是生物学研究中常用的一种缓冲溶液，用于细胞培养、组织运输和实验过程中细胞的清洗等。传统的Hanks'平衡盐溶液含有钙和镁离子，但也有一些修改版的配方，其中不含钙和镁（通常表示为HBSS without calcium and magnesium或HBSS-/-）。

HANKS'平衡盐溶液,不含钙镁

HANKS'平衡盐溶液,不含钙镁主要由以下几种盐组成：

氯化钠（NaCl）：提供主要的渗透压和离子平衡。

氯化钾（KCl）：维持细胞内外的钾离子浓度梯度。

磷酸二氢钠（Na2HPO4）和磷酸二氢钾（KH2PO4）：作为缓冲系统，帮助维持溶液的pH值。

碳酸氢钠（NaHCO3）：作为缓冲系统的一部分，帮助维持溶液的pH值。

HANKS'平衡盐溶液,不含钙镁的使用场景包括：

细胞解离：某些细胞类型需要在没有钙和镁的情况下进行解离，因为这些离子可能促进细胞之间的粘附。

细胞清洗：在细胞分选或其他实验操作中，可能需要使用不含钙镁的溶液来清洗细胞，以避免这些离子对实验的干扰。

细胞收集：在进行某些细胞学实验时，可能会使用不含钙镁的Hanks'平衡盐溶液来收集细胞。

组织运输和保存：有时也会使用这种溶液来运输和短期保存组织样本。

HANKS'平衡盐溶液,不含钙镁注意事项：

使用前应确认溶液的pH值和渗透压：确保它们适合特定的细胞类型和实验要求。

无菌操作：在细胞培养等实验中，应确保溶液是无菌的，以避免污染。

储存条件：应按照制造商的指导存储溶液，并在打开后尽快使用，避免污染。

HANKS'平衡盐溶液,不含钙镁使用步骤:

1.预热溶液：将HANKS'平衡盐溶液,不含钙镁预热至37°C，以模拟体内温度，减少对细胞的应激。

2.清洗细胞：

将培养的细胞从培养容器中取出。

使用无菌吸管或移液器，轻轻吸除培养液。

用HANKS'平衡盐溶液,不含钙镁的溶液轻轻冲洗细胞，去除残留的培养液和代谢废物。通常需要冲洗2-3次。

3.细胞解离：

如果需要进行细胞解离，使用HANKS'平衡盐溶液,不含钙镁可以减少细胞间的粘连，便于解离过程。

将HANKS'平衡盐溶液,不含钙镁加入含有细胞的容器中，轻轻摇动或吹打以帮助细胞解离。

4.细胞计数和稀释：

可以使用HANKS'平衡盐溶液,不含钙镁来稀释细胞进行计数，因为它提供了与细胞生长相似的离子环境。

将适量的细胞悬液与HANKS'平衡盐溶液,不含钙镁混合，然后使用细胞计数器进行计数。

5.细胞运输：

HANKS'平衡盐溶液,不含钙镁也用于运输细胞，特别是当需要在实验室之间转移细胞时。

6.配制其他溶液：

HANKS'平衡盐溶液,不含钙镁可以作为基础溶液，用于配制其他细胞培养或实验所需的溶液。

应用^[4][5]

HANKS'平衡盐溶液,不含钙镁可以用于阿司匹林对结肠癌细胞保护性自噬的作用及机制研究

研究阿司匹林对结肠癌细胞“保护性自噬”的作用及可能的机制。

方法1.通过TIMER和Prognsan数据库分析自噬相关蛋白SQSTM1/p62在结肠癌中表达水平及其对生存期的影响;免疫组化分析SQSTM1/p62在结肠癌及癌旁组织中的表达,并探讨其表达水平与患者病理资料的相关性;

2.CCK-8、平板克隆形成、划痕愈合实验检测阿司匹林对结肠癌细胞HCT-116、SW480增殖、集落形成和迁移能力影响;利用HANKS'平衡盐溶液,不含钙镁模拟体内营养缺乏微环境,基于此分为4组:正常对照组、HANKS'平衡盐溶液,不含钙镁干预组、低剂量阿司匹林+Hank’s干预组、高剂量阿司匹林+Hank’s干预组,HE染色观察细胞形态变化、透射电镜观察细胞自噬、Western blot检测自噬及凋亡相关蛋白(p62、LC3、Bax、Bcl-2)的表达;慢病毒转染技术构建HCT-116、SW480自噬研究的细胞模型,荧光显微镜、流式细胞仪检测转染效率,激光共聚焦显微镜检测上述4组细胞内自噬流的变化;

3. Western blot检测上述4组TRIM33蛋白的表达情况;利用脂质体法转染TRIM33-si RNA,Western blot检测敲降效率,在此基础上将实验分为3组:阴性对照组、si-TRIM33组、阿司匹林+si-TRIM33组,透射电镜用于观察自噬、Western blot检测TRIM33、p62、LC3蛋白表达的变化。

结果1.TIMER数据库提示SQSTM1/p62在结肠癌中高表达(P<0.05);Prognsan数据库提示SQSTM1/p62表达水平越高,患者预后越好;免疫组化结果示SQSTM1/p62在结肠癌组织中的表达显著高于癌旁组织(P<0.05),其表达水平与患者临床病理资料均无关(P>0.05);

2.CCK-8结果显示,阿司匹林抑制结肠癌细胞的增殖,其中HCT-116在24h和48h的IC50分别为2.96、1.34mmol/L,SW480在24h和48h的IC50分别为1.74、1.37mmol/L,选取0.5mmol/L、1mmol/L进行下列实验;平板克隆形成、划痕愈合实验结果提示阿司匹林抑制结肠癌细胞的克隆形成及迁移能力(P<0.05),HE染色结果提示:与正常对照组相比,HANKS'平衡盐溶液,不含钙镁干预组细胞形态变圆,细胞密度显著减少,在HANKS'平衡盐溶液,不含钙镁干预组的基础上阿司匹林处理后,细胞核位置深染,胞质浓缩,细胞密度进一步减少;透射电镜结果表明,与HCT-116正常组细胞相比,Hank’s干预组胞质内可见大量自噬小体及自噬溶酶体,在Hank’s干预组的基础上给予阿司匹林后,胞质内自噬小体和自噬溶酶体显著减少,线粒体嵴断裂;Western blot结果显示:与正常对照组相比,HANKS'平衡盐溶液,不含钙镁干预组p62蛋白表达水平下降,LC3II/ACTB、Bax/Bcl-2的表达上升(P<0.05),与Hank’s干预组相比,阿司匹林干预后p62、Bax/Bcl-2蛋白表达上升,LC3II/ACTB的表达下降(P<0.05);流式细胞仪和荧光显微镜结果显示:与对照组结肠癌细胞相比,转染组细胞荧光表达率约达90%以上,提示细胞系构建成功;激光共聚焦显微镜检测自噬流结果显示:与对照组细胞相比,Hank’s干预组细胞内红绿色荧光斑点数目明显增加,表明自噬被激活;与Hank’s干预组相比,阿司匹林干预后出现红绿色荧光均减弱,说明阿司匹林可以抑制Hank’s诱导的自噬流.

参考文献

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[5]吴晓婷.阿司匹林对结肠癌细胞保护性自噬的作用及机制研究[D].宁夏医科大学,2022.