RENIN抗体的应用

背景^[1-3]

RENIN抗体也被称为肾素抗体，主要用于生物医学研究和实验中，以检测和分析肾素（Renin）蛋白的表达和功能。肾素是一种由肾脏的球旁颗粒细胞释放的蛋白水解酶，它在肾素-血管紧张素系统（RAAS）中起着关键作用，参与调节血压、电解质平衡和体液量等多种生理过程。以下是对RENIN抗体的详细介绍：

RENIN抗体

一、RENIN抗体的类型

RENIN抗体主要分为多克隆抗体和单克隆抗体两种类型。多克隆抗体由多个B细胞克隆产生的抗体混合物，具有较广泛的识别表位和较高的亲和力；而单克隆抗体则是由单一B细胞克隆产生的，具有高度特异性和均一性。不同的供应商会提供不同来源和规格的RENIN抗体，以满足不同实验的需求。

二、RENIN抗体的功能与使用场景

RENIN抗体在生物医学研究中具有多种功能和应用，主要包括：

检测肾素表达：RENIN抗体可用于检测细胞、组织或体液中肾素的表达水平，有助于了解肾素在生理和病理条件下的变化。

研究RAAS系统：通过检测肾素及其下游产物（如血管紧张素I、II等）的表达和活性，RENIN抗体有助于深入研究RAAS系统的调节机制和在疾病中的作用。

疾病诊断与预后评估：在某些疾病（如高血压、心血管疾病等）中，肾素的表达水平可能发生变化。因此，RENIN抗体可用于这些疾病的诊断、病情监测和预后评估。

药物研发：RENIN抗体还可用于评估药物对肾素及其下游产物的抑制作用和药效学特性，为药物研发提供有力支持。

三、RENIN抗体的保存与使用

RENIN抗体在保存和使用过程中需要注意以下几点：

保存条件：RENIN抗体应存放在适当的温度下，通常建议存放在-20°C或更低温度的冰箱中，以避免抗体降解和失活。在短期使用或频繁取用时，可置于4°C冰箱中保存，但应避免反复冻融。

稀释倍数：RENIN抗体的稀释倍数应根据具体实验需求进行调整。不同的实验方法（如Western Blotting、免疫组化、流式细胞术等）可能需要不同的稀释倍数。一般来说，抗体的稀释倍数应经过预实验确定，以确保实验结果的准确性和可靠性。

稳定性：RENIN抗体的稳定性受多种因素影响，包括温度、pH值、离子强度等。在保质期内，按照适当的条件存储和使用，RENIN抗体的活性应保持稳定。

应用^[4][5]

RENIN抗体可以用于Egr1通过肾脏RAS调控糖尿病肾脏疾病进展的作用及机制研究

Egr1通过上调RAS系统(AGT,renin,ACE,AT1R)促进DKD进展,敲减Egr1可以全面抑制肾脏RAS系统,延缓DKD进展,可能为DKD提供新的治疗途径。

方法1动物实验(1)第一部分:高脂饮食及链脲佐菌素诱导C57BL/6小鼠建立DM模型,成模12w处死;(2)第二部分:DM小鼠12-16w采用流体力学方法每周尾静脉注射相应质粒,建立Egr1敲减及Egr1过表达DM小鼠模型。2细胞培养人肾近曲小管细胞(HK2)于RPMI-1640培养基(2.0g/L葡萄糖)+10%FBS中培养;小鼠肾小球系膜细胞(SV40 MES 13)及人胚肾293T细胞于含1.0g/L糖的DMEM培养基+5%FBS中培养,培养箱环境为:37℃、5%C02,据细胞生长情况传代、换液、铺板或进行其他实验操作。3细胞转染细胞转染的前一天,以60-80%的细胞密度平均接种于细胞培养板中,以无血清培养基饥饿24小时后,使用lipo3000进行转染,达到基因的过表达或敲减。4实时荧光定量PCR(RT-qPCR)组织及细胞总RNA使用Trizol提取,一步法逆转录RNA为cDNA。使用SYBR试剂进行RT-qPCR反应,以β-actin作为内参,按2-△△Ct方法计算得出目的基因表达量。

5 RENIN抗体Western BlotRIPA法裂解并提取组织及细胞总蛋白。每孔蛋白上样量为20-50ug。采用10%的SDS-PAGE胶电泳分离样品蛋白,湿转到PVDF膜(0.45μm)上。然后使用5%脱脂奶粉或BSA封闭,一抗4℃摇床过夜孵育,二抗室温孵育1h。使用Odyssey近红外成像系统发光显影,采用Gel-Pro analyzer软件分析结果。6肾组织病理学及RENIN抗体免疫组化分离并取出肾脏,石蜡包埋后制备3μm组织切片。PAS染色法和Masson染色法用于观察肾组织的纤维化程度;免疫组织化学法用于分析Egr1,RAS及纤维化指标的表达情况。

7.RENIN抗体染色质免疫共沉淀细胞分为对照组、TGF-β1(2h)及TGF-β1(48h)刺激组,根据ChIP-ITR Express kit(Active Motif,Bedford,MA)试剂盒步骤进行操作,采用抗Egr1抗体或对照IgG来交联蛋白质-DNA,使用RT-qPCR来检测富集效应。使用标准曲线法计算富集倍数。8双荧光素酶报告基因构建ACE荧光素酶质粒(GV238-ACE),将不同浓度梯度Egr1质粒(pENTER-Egr1)和GV238-ACE共转染,利用双荧光素酶报告基因检测试剂盒检测各组海肾荧光及萤火虫荧光值。9激光共聚焦肾脏组织切片共染Egr1及AGT抗体,Leica TCS-SL共聚焦显微镜下观察共定位情况。10.RENIN抗体酶联免疫吸附法采用酶联免疫吸附法试剂盒分别检测血葡萄糖、糖化血红蛋白、肌酐、.血脂、尿白蛋白、肾组织AngII。11统计分析采用SPSS21.0统计软件分析实验数据,各指标数据采用均数±标准差(X±SD)表示。正态分布两两比较采用两独立样本t检验,非正态分布采用Mann-Whitney U检验。多组均数比较采用单因素方差分析(One-way ANOVA)。首先进行Levene方差齐性检验和方差分析,若方差齐(P>0.05)且组间均数有显著性差异(P<0.05),进一步采用LSD法作组间多重比较;若方差不齐(P<0.05),选择近似F检验Welch法校正;若组间均数有显著性差异(P<0.05),则采用Dunnett's T3法作多重比较;P<0.05时被认为差异具有统计学意义。

结果1 DM小鼠成模后12w,24h尿白蛋白明显升高,肾皮质中Egr1及RAS(AGT,renin,ACE,AT1R)的mRNA及蛋白表达水平均升高。2重组人TGF-β1蛋白干预HK2细胞后Egr1的mRNA及蛋白水平呈一过性瞬时升高,RAS(AGT,renin,ACE,AT1R)的mRNA及蛋白表达水平均升高。随着Egr1浓度(Oug,1ug,2ug,4ug)升高,AGT,renin,ACE,AT1R mRNA及蛋白逐渐升高。敲减Egr1后,AGT,renin,ACE,AT1RmRNA及蛋白随之下调。3 DM小鼠肾皮质激光共聚焦显示Egr1与AGT共定位。4.RENIN抗体染色质免疫共沉淀实验证实AGT,renin,ACE,AT1R基因启动子上存在Egr1的结合位点,TGF-β1刺激后AGT,renin,ACE,AT1R富集效率增加。

参考文献

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[2]Cerebellar Insulin/IGF-1 signaling in diabetic rats:Effects of exercise training[J].Mariana Eiras Borges;;Alessandra Mussi Ribeiro;;JoséRodrigo Pauli;;Luciana Mendonça Arantes;;Eliete Luciano;;Leandro Pereira de Moura;;JoséAlexandre Curiacos de Almeida Leme;;Alessandra Medeiros;;Natália Oliveira Bertolini;;Clarice Yoshiko Sibuya;;Ricardo JoséGomes.Neuroscience Letters,2017

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[4]Renal Protective Effects of Low Molecular Weight of Inonotus obliquus Polysaccharide(LIOP)on HFD/STZ-Induced Nephropathy in Mice[J].Yen-Jung Chou;;Wei-Chih Kan;;Chieh-Min Chang;;Yi-Jen Peng;;Hsien-Yi Wang;;Wen-Chun Yu;;Yu-Hsuan Cheng;;Yu-Rou Jhang;;Hsia-Wei Liu;;Jiunn-Jye Chuu.International Journal of Molecular Sciences,2016(9)

[5]胡芳.Egr1通过肾脏RAS调控糖尿病肾脏疾病进展的作用及机制研究[D].南方医科大学,2018.