小鼠肝细胞生长因子(HGF)ELISA试剂盒的应用

背景^[1-3]

小鼠肝细胞生长因子(HGF)ELISA试剂盒是用于定量检测小鼠体内肝细胞生长因子(HGF)浓度的研究工具，广泛应用于科研实验领域。

小鼠肝细胞生长因子(HGF)ELISA试剂盒产品特点：

高效、灵敏、特异的抗体：采用高效、灵敏、特异的抗体，确保检测结果的准确性和可靠性。

稳定的重复性和可靠性：经过严格的质量控制，确保试剂盒在不同批次和不同时间内的检测结果具有高度的稳定性和可重复性。

多种标本类型适用：适用于血清、血浆、组织匀浆液、细胞培养上清液、尿液等多种标本类型。

操作简便：操作步骤简单明了，适合科研工作者快速上手。

经济实惠：相对于其他检测方法，ELISA试剂盒具有成本较低、性价比高的优势。

小鼠肝细胞生长因子(HGF)ELISA试剂盒

小鼠肝细胞生长因子(HGF)ELISA试剂盒操作步骤

实验开始前，各试剂均应平衡至室温（试剂不能直接在37℃溶解）；试剂或样品稀释时，均需混匀，混匀时尽量避免起泡。实验前应预测样品含量，如样品浓度过高时，应对样品进行稀释，以使稀释后的样品符合试剂盒的检测范围，计算时再乘以相应的稀释倍数。

1.加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100μl，余孔分别加标准品或待测样品100μl，注意不要有气泡，加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，酶标板加上盖或覆膜，37℃反应120分钟。为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。

2.弃去液体，甩干，不用洗涤。每孔加检测溶液A工作液100μl（在使用前一小时内配制），酶标板加上覆膜,37℃反应60分钟。

3.温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分钟，大约400μl/每孔，甩干（也可轻拍将孔内液体拍干）。

4.每孔加检测溶液B工作液（同检测A工作液）100μl，酶标板加上覆膜37℃反应60分钟。

5.温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分钟，350μl/每孔，甩干（也可轻拍将孔内液体拍干）。

6.依序每孔加底物溶液90μl，酶标板加上覆膜37℃避光显色（30分钟内，此时肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度兰色，后3-4孔梯度不明显，即可终止）。

7.依序每孔加终止溶液50μl，终止反应，此时蓝色立转黄色。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。为了保证实验结果的准确性，底物反应时间到后应尽快加入终止液。

8.用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度（OD值）。在加终止液后立即进行检测。

应用^[4][5]

小鼠肝细胞生长因子(HGF)ELISA试剂盒可以用于糖尿病小鼠肝脏中STAT1、PPAR-γ和HGF的表达及丹参素的干预作用

以链脲佐菌素(STZ)诱导小鼠产生糖尿病,观察糖尿病小鼠肝脏组织中信号转导和转录活化因子1(STATl)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPAR-γ)以及肝细胞生长因子(HGF)的表达变化及丹参素对其表达的影响,探讨丹参素对糖尿病小鼠肝脏保护作用的可能机制,为临床应用提供理论和实验依据。

方法：1.建立糖尿病小鼠模型及分组：健康C57BL/6雄性小鼠,随机分为正常对照组(C组,n=10),剩余小鼠一次性腹腔注射STZ200mg/kg(STZ500mg,加0.1mol/L柠檬酸溶液定容至50m1),72h后于小鼠尾尖取血,测定空腹血糖,选取血糖值大于20mmol/L者为糖尿病模型。正常对照组一次性腹腔注射等量0.1mol/L柠檬酸溶液。将筛选合格的糖尿病小鼠再随机分为糖尿病模型组(M组)、低剂量丹参素组(D1组,15mg/kg)、中剂量丹参素组(D2组,30mg/kg)和高剂量丹参素组(D3组,60mg/kg),每组10只。丹参素各组小鼠灌胃给药1次/天,正常组和糖尿病组小鼠灌胃给予同体积生理盐水,连续给药12周。末次给药12小时后,小鼠眼内眦静脉取血,离心(1500g,15min)分离血清；摘取小鼠肝脏,-80℃保存备用。2.空腹血糖、胰岛素、糖基化血红蛋白(GHb)检测：末次给药12小时后运用ACCU-CHEK Active试纸检测小鼠空腹血糖；ELISA法测定血清胰岛素和糖基化血红蛋白含量。3.肝脏功能检测：取小鼠血清,自动生化分析仪AU-5400型检测谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)水平。4.肝脏组织病理学检测：将小鼠肝脏常规石蜡包埋,切片,HE染色,在显微镜下观察肝组织病理学改变。5.Western Blot及小鼠肝细胞生长因子(HGF)ELISA试剂盒检测小鼠肝脏STAT1、PPAR-γ.HGF蛋白的表达：取冻存肝组织按蛋白裂解液说明书提取蛋白质,按照Western Blot测定方法操作,用Gelpro32软件将图片上每个特异条带灰度值数字化,以相应蛋白条带的IOD值/α-tubulin蛋白条带的IOD值表示相对蛋白含量。

小鼠肝细胞生长因子(HGF)ELISA试剂盒结果：1.空腹血糖、胰岛素、糖基化血红蛋白水平：与正常组相比,糖尿病模型组及丹参素组血糖及糖基化血红蛋白水平均显著增高(P<0.01),而胰岛素水平显著降低(P<0.01),高、中、低剂量丹参素对血糖、胰岛素及糖基化血红蛋白水平均无明显影响。2.肝功能测定：与正常对照组比较,糖尿病组小鼠血清ALT显著升高(P<0.05)；与糖尿病组比较,丹参素组小鼠血清AST、ALT水平明显下降(P<0.05)；丹参素各剂量组间比较无显著性差异(P>0.05)3.肝脏组织病理形态学改变：糖尿病模型组小鼠肝小叶界限不清,肝细胞脂肪变性,排列紊乱,未见明显肝间质纤维化。各剂量丹参素组小鼠肝小叶紊乱程度减轻,,肝细胞排列基本规则,细胞脂肪变性明显减少,但不同剂量组间无明显差异。4.丹参素对糖尿病小鼠肝脏组织中STAT1、PPAR-γ和HGF蛋白表达的影响：与正常组比较,糖尿病小鼠肝组织中STAT1表达明显增加(P<0.01),PPAR-γ和HGF的表达明显降低(P<0.01)；而丹参素可明显上调肝脏组织中PPAR-γ和HGF的表达,减少STAT1的表达,此作用随着丹参素剂量的增加而逐步增强(P<0.01)高剂量丹参素(60mg/kg)组STAT1的表达与正常组无明显差异(P>0.05)5.小鼠肝细胞生长因子(HGF)ELISA试剂盒相关性分析结果：各组小鼠肝脏组织中PPAR-γ和HGF的表达呈正相关(r=0.934,P<0.001),而STAT1与PPAR-γ和HGF的表达均呈负相关(r值分别为-0.825和-0.910,P<0.001)

参考文献

[1]Cytokines tumor necrosis factor-αand interferon-γinduce pancreaticβ-cell apoptosis through STAT1-mediated Bim protein activation.[J].Barthson Jenny;;Germano Carla M;;Moore Fabrice;;Maida Adriano;;Drucker Daniel J;;Marchetti Piero;;Gysemans Conny;;Mathieu Chantal;;Nuñez Gabriel;;Jurisicova Andrea;;Eizirik Decio L;;Gurzov Esteban N.The Journal of biological chemistry,2011

[2]Danshensu has anti-tumor activity in B16F10 melanoma by inhibiting angiogenesis and tumor cell invasion[J].Li-juan Zhang;;Lei Chen;;Yin Lu;;Jia-ming Wu;;Bo Xu;;Zhi-guang Sun;;Shi-zhong Zheng;;Ai-yun Wang.European Journal of Pharmacology,2010(2)

[3]The induction of STAT1 gene by activating transcription factor 3 contributes to pancreaticβ-cell apoptosis and its dysfunction in streptozotocin-treated mice[J].Ji Yeon Kim;;Eun Hyeon Song;;SeNa Lee;;Joo Hyun Lim;;Joo Sun Choi;;In-uk Koh;;Jihyun Song;;Won-Ho Kim.Cellular Signalling,2010(11)

[4]Proinsulin C-peptide antagonizes the profibrotic effects of TGF-beta1 via up-regulation of retinoic acid and HGF-related signaling pathways.[J].Hills Claire E;;Willars Gary B;;Brunskill Nigel J.Molecular endocrinology(Baltimore,Md.),2010

[5]刘金苹.糖尿病小鼠肝脏中STAT1、PPAR-γ和HGF的表达及丹参素的干预作用[D].山东大学,2012.