MFC 小鼠胃癌细胞的应用

背景^[1-3]

MFC小鼠胃癌细胞是一种重要的实验细胞系，广泛应用于胃癌相关的科学研究中。来源：MFC小鼠胃癌细胞来源于小鼠的胃黏膜上皮细胞，具体是通过源自615小鼠前胃鳞癌移植瘤FC瘤组织，利用小块法培养得到的。建立时间：MFC细胞系由钱书森、高进等于1985年建立，至今已传代多次，表明其具有较高的稳定性和可传代性。生长情况：MFC细胞在培养条件下呈贴壁生长。细胞形态：细胞形态可能因培养条件和传代次数而有所变化，但一般具有胃癌细胞的典型特征。培养环境：MFC细胞需要在特定的培养环境中生长，包括空气（95%）和二氧化碳（5%）的混合气体，以及适宜的温度（通常为37℃）。

MFC小鼠胃癌细胞主要用于科学研究，包括但不限于以下几个方面：

胃癌发病机制研究：通过MFC细胞系，科学家可以研究胃癌的发生、发展机制，以及相关的基因表达和信号通路。

药物筛选与评估：MFC细胞系也可用于抗癌药物的筛选和评估，帮助研究人员发现新的治疗靶点和药物。

细胞生物学研究：MFC细胞系还可用于细胞生物学的基本研究，如细胞增殖、分化、凋亡等过程的调控机制。

MFC小鼠胃癌细胞

MFC小鼠胃癌细胞培养操作

1)复苏MFC小鼠胃癌细胞：以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主。

将含有1 mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10 cm皿中，加入约8 mL培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

2)MFC小鼠胃癌细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，弃去消化液，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

c、按6-8 mL/瓶补加培养基，轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心4 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。

d、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。

3)MFC小鼠胃癌细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面T25瓶为例；

a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。

b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。

c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

应用^[4][5]

MFC小鼠胃癌细胞可以用于褪黑素抗小鼠胃癌作用及其膜受体机制研究

研究应用MFC小鼠胃癌细胞建立荷胃癌小鼠模型，不同浓度褪黑素干预后，运用实时荧光定量RT-PCR、免疫印迹等方法检测相关因子的表达变化。结果表明：①褪黑素能够缩小荷胃癌小鼠的肿瘤体积，减轻肿瘤重量，达到抗肿瘤作用；②褪黑素在抑制肿瘤生长过程中下调肿瘤组织Bcl-2表达，上调Bax和p21表达，从而抑制肿瘤细胞增殖，促进肿瘤细胞凋亡；③褪黑素促进肿瘤组织膜受体MT1、MT2表达，表明褪黑素可能通过膜受体MT1、MT2途径实现抗小鼠胃癌生长的作用。

2. 褪黑素体外抗MFC小鼠胃癌细胞增殖作用及其对褪黑素膜受体MT1、MT2的影响为研究褪黑素体外抗小鼠胃癌细胞增殖作用及其与褪黑素膜受体MT1、MT2的关系，本部分研究建立不同浓度时间点褪黑素对MFC小鼠胃癌细胞干预模型，流式细胞术、CCK-8、实时荧光定量RT-PCR、免疫印迹等方法检测胃癌细胞增殖活性及细胞周期变化，Bcl-2、Bax、p21、MT1与MT2基因及蛋白表达改变，反义核酸技术（siRNA）沉默MT2表达，观测对细胞增殖活性的影响。结果表明：①CCK-8结果显示褪黑素抑制小鼠胃癌细胞增殖，呈时间剂量依赖性；②流式细胞术检测结果显示褪黑素抑制小鼠胃癌细胞增殖与细胞周期G1/S期阻滞有关；③褪黑素在抑制小鼠胃癌细胞的增殖过程中下调肿瘤细胞Bcl-2的表达，上调Bax和p21的表达；④褪黑素促进小鼠胃癌细胞膜受体MT1、MT2表达；⑤应用siRNA技术沉默MT2表达，结果发现siRNA介导的MT2沉默能明显拮抗褪黑素对胃癌细胞增殖的抑制作用，提示褪黑素促进肿瘤细胞凋亡，抑制肿瘤细胞增殖与褪黑素膜受体MT2有关。

3. MAPKs及PI3K-Akt信号通路在褪黑素抑制小鼠胃癌细胞增殖中的作用为研究MAPKs及PI3K-Akt信号通路在褪黑素抑制胃癌细胞增殖过程中的作用，本部分研究建立褪黑素在不同时间点干预MFC小鼠胃癌细胞的体外模型，免疫印迹法检测胃癌细胞p-ERK/ERK、p-Akt/Akt的表达，利用siRNA技术沉默MT2表达探讨MAPKs及PI3K/Akt信号通路在褪黑素抑制胃癌细胞增殖中的作用。

结果发现：①褪黑素作用24h后明显下调MFC小鼠胃癌细胞的ERK1/2、Akt磷酸化，提示褪黑素通过抑制ERK1/2、Akt的磷酸化从而抑制胃癌细胞增殖；②沉默MT2可部分阻断褪黑素抑制ERK1/2、Akt磷酸化的作用，提示褪黑素可通过MT2受体抑制ERK1/2、Akt的磷酸化从而抑制胃癌细胞增殖。综上所述，体内外实验证实褪黑素能够抑制小鼠胃癌细胞增殖，其机制包括抑制抗凋亡基因Bcl-2表达、促进促凋亡基因Bax表达、促进p21蛋白表达、上调MT1、MT2受体，并通过MT2受体抑制ERK1/2、Akt的磷酸化，从而促进肿瘤细胞凋亡，抑制肿瘤细胞增殖。

参考文献

[1]Melatonin membrane receptors in peripheral tissues:Distribution and functions[J].Radomir M.Slominski;;Russel J.Reiter;;Natalia Schlabritz-Loutsevitch;;Rennolds S.Ostrom;;Andrzej T.Slominski.Molecular and Cellular Endocrinology,2012(2)

[2]Melatonin synergistically enhances cisplatin‐induced apoptosis via the dephosphorylation of ERK/p90 ribosomal S6 kinase/heat shock protein?27 in SK‐OV‐3 cells[J].BongleeKim;Sun‐MiYun;Do YoungChoi;Sung‐HoonKim.Journal of Pineal Research,2012(2)

[3]Chapter 2 PI3K/PTEN Signaling in Angiogenesis and Tumorigenesis[J].Bing‐Hua Jiang;;Ling‐Zhi Liu.Advances in Cancer Research,2009

[4]Melatonin Synergizes with Oxytocin to Enhance Contractility of Human Myometrial Smooth Muscle Cells[J].James T.Sharkey;;Roopashri Puttaramu;;R Ann Word;;James Olcese.The Journal of Clinical Endocrinology&Metabolism,2009(2)

[5]徐丽.褪黑素抗小鼠胃癌作用及其膜受体机制研究[D].福建医科大学,2012.