瑞特染色剂的应用

背景及概述^[1][2]

瑞特染色剂是由酸性染料伊红和碱性染料亚甲蓝组成有复合染料。亚甲蓝为四甲基硫堇染料，有对醌型和邻醌型两种结构。通常为氯盐，即氯化美蓝。美蓝容易氧化为一、二、三甲基硫堇等次级染料。市售美蓝中部分已被氧化为天青。伊红通常为钠盐。即伊红和伊混合后，产生一种憎液性胶体伊红美蓝中性沉淀，即瑞特染色剂。

瑞特染色剂，直接使用，无需任何配制过程，染液中加微量中性甘油，防止甲醇挥发或氧化，同时也可使血细胞染色较清晰。经常用于血液和细胞涂片、骨髓细胞涂片、细菌染色。细胞质呈红色，细胞核及细菌呈蓝色，嗜酸性颗粒呈橘红色。

理化性质及结构^[1]

新鲜配制的瑞特染色剂偏碱性，须在室温或是37℃下贮存一定时间，待瑞特染色剂成熟，主要是美蓝逐渐转变为天青B后才能使用，贮存时愈久，染色效果愈好。EAmGILLILAND等采用吸光度比值作为瑞特染色剂的质量规格。rA测定方法如下：取瑞特染液15-25μl（视染液浓度而定），加甲醇10ml稀释，混匀后以甲醇为空折管，分别以波长650nm和25nm比色。因为美蓝吸收峰小组长为650nm，伊红吸收峰波长为525nm；天青B吸收峰也为650nm但吸光度A约为美蓝的一半。

所以新配染料rA接近2，随着美蓝逐渐氧化为天青B，RA也相应下降。RA下降到1.3±0.1时即可使用。瑞特染色剂贮存过程中，必须塞严，以防止甲醇挥发和被氧化成甲酸。有人主张在配方中加入甘油30ml，防止甲醇挥发，关可合细胞染色清晰。甲醇必须纯净，如甲醇中丙酮含量过多，染色偏酸，使白细胞着色不良。

瑞特染色剂

应用^[3]

瑞特染色剂对细胞的染色既有物理的吸附作用，又有化学的亲和作用，各种细胞成分化学性质不同，对各种染料的亲和力也不一样。因此，用本染料液染色后，在同一血片上，可以看到各种不同的色彩，例如血红蛋白，嗜酸性颗粒为碱性蛋白质，与酸性染料伊红结果，染粉红色，称为嗜酸性物质；细胞核蛋白和淋巴细胞胞浆为酸性，与碱性染料美蓝或天青结合，染紫蓝色，称为嗜碱性物质；中性颗粒呈等电状态与伊红和美蓝均可结合，染淡紫色，称为中性物质。

瑞特染色剂中，PH对细胞染色有影响。细胞各种成分均不蛋白质，由于蛋白质系两性电解质，所带电荷随溶液PH而定，在偏酸性环境中下在电荷增多，易与伊红结合，染色偏红；在偏酸性环境中负电荷增多，易与美蓝或天青结合，染色偏蓝。因此细胞染色对氢离子浓度十分敏感，染色用正经片必须清洁，无酸碱污染。配制瑞特染色剂必须用优质甲醇，稀释瑞特染色剂必须用缓冲液，冲洗用水应近中性，否则可导致各种细胞染色反应异常，以致识别困难，甚至造成错误。

为发观察细胞内部结构，识别各种细胞及其异常变化，血涂片必须嘲行染色。血涂片的各种染色方法大多是罗氏染色法衍变来的。目前常用瑞特染色法。显微镜涂片用染色剂，如血、骨髓的染色，血液中寄生虫染色(原虫、利什曼原虫、血丝虫等)。生物染色。显微镜涂片用染色剂，如血、骨髓的染色、血液中寄生虫染色(原虫、利什曼原虫、血丝虫等)。

使用方法 ^[2]

1、常规方法制备血液涂片或骨髓涂片或细菌涂片，待涂片自然干燥。

2、将血液涂片或骨髓涂片置于染色架上。

3、滴加适量瑞氏色素覆盖涂片，室温染色 1～2min。

4、涂片滴加等量磷酸盐缓冲液，轻轻晃动玻片或采用其他方式混合，使磷酸盐缓冲液与瑞氏色素混匀，室温静置 3～10min。

5、用自来水或蒸馏水从玻片一端轻轻冲洗。(注:也可先用磷酸盐缓冲液冲洗玻片，时间控制在 30s左右。)

6、干燥。

7、镜检:先用低倍镜观察血涂片，再用油镜。。

主要参考资料

[1] 周爱民. (2012). 瑞特染色法白带涂片技术的应用. 中国保健营养旬刊(10), 499-500.

[2] 杨颉, 孟冬梅, 宋文斌, 孙晓玲, & 陈兵. (2007). 巨核细胞酶标染色法在贫血鉴别诊断中的应用价值. 临床血液学杂志, 20(2), 96-98.

[3] 李敏, 刘航, 徐智芳, 刘向荣, 王洋, & 饶青等. (2008). 白血病细胞系中抑癌基因pten启动子区甲基化状态检测及其去甲基化研究. 中华血液学杂志, 29(5), 289-292.