人心钠肽(ANP)ELISA试剂盒的应用

背景^[1-3]

人心钠肽(ANP)ELISA试剂盒是一种用于体外定量检测人血清、血浆或其他相关生物液体中人心钠肽（ANP）浓度的实验试剂盒。以下是一些关于人心钠肽（ANP）ELISA试剂盒的详细信息：

人心钠肽(ANP)ELISA试剂盒试剂盒组成及原理

原理：人心钠肽(ANP)ELISA试剂盒通常采用竞争法酶联免疫吸附检测技术（ELISA）。通过向预先包被了人心钠肽抗原的酶标孔中依次加入标准品和样本，再加入生物素标记的抗心钠肽抗体，与HRP标记的链霉亲和素结合，形成免疫复合物。经过温育和洗涤后，加入显色底物TMB，产生蓝色，最终在酸的作用下转化成黄色。通过测量450 nm处的吸光度（OD值），可以计算样本中人心钠肽的浓度。

组成：人心钠肽(ANP)ELISA试剂盒通常包含微孔酶标板、标准品、样本稀释液、检测抗体-HRP、洗涤缓冲液、底物A和B、终止液、封板膜等。

人心钠肽(ANP)ELISA试剂盒

人心钠肽(ANP)ELISA试剂盒操作步骤

实验开始前，各试剂均应平衡至室温（试剂不能直接在37℃溶解）；试剂或样品稀释时，均需混匀，混匀时尽量避免起泡。实验前应预测样品含量，如样品浓度过高时，应对样品进行稀释，以使稀释后的样品符合试剂盒的检测范围，计算时再乘以相应的稀释倍数。

1.加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100μl，余孔分别加标准品或待测样品100μl，注意不要有气泡，加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，酶标板加上盖或覆膜，37℃反应120分钟。为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。

2.弃去液体，甩干，不用洗涤。每孔加检测溶液A工作液100μl（在使用前一小时内配制），酶标板加上覆膜,37℃反应60分钟。

3.温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分钟，大约400μl/每孔，甩干（也可轻拍将孔内液体拍干）。

4.每孔加检测溶液B工作液（同检测A工作液）100μl，酶标板加上覆膜37℃反应60分钟。

5.温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分钟，350μl/每孔，甩干（也可轻拍将孔内液体拍干）。

6.依序每孔加底物溶液90μl，酶标板加上覆膜37℃避光显色（30分钟内，此时肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度兰色，后3-4孔梯度不明显，即可终止）。

7.依序每孔加终止溶液50μl，终止反应，此时蓝色立转黄色。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。为了保证实验结果的准确性，底物反应时间到后应尽快加入终止液。

8.用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度（OD值）。在加终止液后立即进行检测。

应用^[4][5]

人心钠肽(ANP)ELISA试剂盒可以用于重组人心钠肽治疗急性心力衰竭有效性和安全性临床研究

心钠肽(atrial natriuretic peptide,ANP),是一种由心房组织分泌的28个氨基酸的多肽类激素,能影响体液容量及其循环的生理调节。其主要药理学功能是扩张血管,减轻心脏的前后负荷,利钠利尿以及抑制肾素-血管紧张素-醛固酮系统。心钠肽通过与含鸟苷酸环化酶结构域的特殊膜结合受体结合,来提高细胞内的cGMP水平,从而达到其药理功效。血管组织的细胞内cGMP提高会导致血管舒张；而在肾脏,则使尿量和尿电解质增加,并增加肾血流量和肾小球滤过率。增加体内的ANP水平有利于血管扩张、利钠和利尿,因此急性心衰患者给予ANP治疗有利于症状改善。

本研究应用Swan-Ganz导管进行血流动力学监测,观察短期静脉应用重组人心钠肽治疗急性心力衰竭患者的血流动力学效应及安全性。顺序入选中国2家心血管临床中心的48例急性心力衰竭患者,随机分入3个心钠肽试验组和1个对照组(各12例受试者)。患者用药前应用Swan-Ganz导管进行血流动力学监测,心钠肽组在急性心力衰竭常规治疗基础上接受重组人心钠肽持续静脉泵入60min(速率为A组0.05μg/(kg·min)、B组0.1μg/(kg·min)、C组0.2μg/(kg·min)),对照组仅给予急性心力衰竭常规治疗。分别在给药即刻、给药后30min、1h、3h、12h测量并记录血流动力学参数,同时记录治疗前、后呼吸困难、其他临床症状以及全身临床情况。使用人心钠肽(ANP)ELISA试剂盒定期测量心钠肽(ANP)含量，定期测量血压、心率、呼吸频率以及相关的血液生化指标,并对试验过程中出现的所有不良事件进行记录,进行安全性评估。

人心钠肽(ANP)ELISA试剂盒结果：用药后重组人心钠肽组患者的肺毛细血管楔压(PCWP)、肺动脉压显著性下降、心脏指数(CI)显著性升高(P<0.05),血流动力学改变在0.1μg/(kg·min)组最明显。对照组在这些方面未见明显改善。在安全性和耐受性方面,HR、血钾、血钠、血肌酐用药后24h无明显变化。0.2μg/(kg·min)组发生2例与试验药物相关的低血压。其中未出现与试验药物相关的严重不良事件,无受试者因不良事件中途退出研究。

参考文献

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[5]栾晓军.重组人心钠肽治疗急性心力衰竭有效性和安全性临床研究[D].北京协和医学院,2011.