大鼠肿瘤坏死因子β(TNF-β)Elisa试剂盒的应用

背景^[1-3]

大鼠肿瘤坏死因子β(TNF-β)Elisa试剂盒是一种用于体外定量检测大鼠样本中TNF-β浓度的实验试剂盒。这些试剂盒主要用于科研目的，不适用于临床诊断。以下是关于大鼠肿瘤坏死因子β（TNF-β）ELISA试剂盒的一些详细信息：

大鼠肿瘤坏死因子β(TNF-β)Elisa试剂盒实验类型：双抗体夹心法。

检测范围：4.68-300 pg/mL（特殊要求可定制）。

灵敏度：2.72 pg/mL。

种属：大鼠。

保存温度：2-8℃。

大鼠肿瘤坏死因子β(TNF-β)Elisa试剂盒样本类型：适用于血清、血浆、组织匀浆、细胞裂解液、细胞培养上清和其他生物液体。

在使用大鼠肿瘤坏死因子β（TNF-β）ELISA试剂盒时，应严格按照说明书进行操作，包括样本的采集与处理、试剂的配制、温育时间、孵育温度等，以确保实验结果的准确性。同时，应注意试剂的保存条件，避免使用过期的试剂，并在操作过程中遵循实验室安全规范。

大鼠肿瘤坏死因子β(TNF-β)Elisa试剂盒

使用大鼠肿瘤坏死因子β(TNF-β)Elisa试剂盒进行实验时，需要按照以下步骤进行：

实验开始前，各试剂均应平衡至室温（试剂不能直接在37℃溶解）；试剂或样品稀释时，均需混匀，混匀时尽量避免起泡。实验前应预测样品含量，如样品浓度过高时，应对样品进行稀释，以使稀释后的样品符合试剂盒的检测范围，计算时再乘以相应的稀释倍数。

1.加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100μl，余孔分别加标准品或待测样品100μl，注意不要有气泡，加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，酶标板加上盖或覆膜，37℃反应120分钟。为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。

2.弃去液体，甩干，不用洗涤。每孔加检测溶液A工作液100μl（在使用前一小时内配制），酶标板加上覆膜,37℃反应60分钟。

3.温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分钟，大约400μl/每孔，甩干（也可轻拍将孔内液体拍干）。

4.每孔加检测溶液B工作液（同检测A工作液）100μl，酶标板加上覆膜37℃反应60分钟。

5.温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分钟，350μl/每孔，甩干（也可轻拍将孔内液体拍干）。

6.依序每孔加底物溶液90μl，酶标板加上覆膜37℃避光显色（30分钟内，此时肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度兰色，后3-4孔梯度不明显，即可终止）。

7.依序每孔加终止溶液50μl，终止反应，此时蓝色立转黄色。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。为了保证实验结果的准确性，底物反应时间到后应尽快加入终止液。

8.用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度（OD值）。在加终止液后立即进行检测。

应用^[4][5]

大鼠肿瘤坏死因子β(TNF-β)Elisa试剂盒可以用于肝硬化大鼠巨脾中M-CSF、TNF-β、IFN-γ和IL-10的表达水平分析

探讨巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)、肿瘤坏死因子β(TNF-β)、干扰素γ(IFN-γ)和白介素10(IL-10)在大鼠肝硬化巨脾中的表达及其意义。

方法:将雄性健康SD大鼠62只随机分为模型组(n=50)和对照组(n=12)。模型组用40%的CCL4花生油溶液配合白酒溶液制成肝硬化脾亢动物模型,对照组同步进行生理盐水灌胃处理。后用大鼠肿瘤坏死因子β(TNF-β)Elisa试剂盒、蛋白印记法和RT-PCR方法检测两组脾脏中M-CSF、TNF-β、IFN-y和IL-10的表达,并运用SPSS统计软件分析,比较两组的差异。

大鼠肿瘤坏死因子β(TNF-β)Elisa试剂盒结果:M-CSF、TNF-β、IFN-y和IL-10在模型组中的阳性表达率分别为60.71%、78.57%、64.29%和87.71%,对照组中分别为25%、33.33%、16.67%和50%,两组差异有统计学意义(P<0.05)。M-CSF、TNF-β、IFN-y和IL-10在模型组中的蛋白表达相对强度分别为0.63±0.58,1.06±0.49,0.99±0.38和1.12±0.42,对照组中分别为0.18±0.12,0.52±0.27,0.38±0.28和0.60±0.32,两组差异有统计学意义(P<0.05)。M-CSF、TNF-β、IFN-γ和IL-10在模型组中的mRNA相对表达水平分别为2.06±0.11,4.07±0.19,2.98±0.11和7.94±0.27,对照组中分别为1.01±0.05,1.06±0.11,1.00±0.31和1.02±0.08,两组差异有统计学意义(P<0.05)。

参考文献

[1]Interleukin 10(IL-10)-mediated Immunosuppression[J].Mittal Sharad K.;;Cho Kyung-Jin;;Ishido Satoshi;;Roche Paul A..Journal of Biological Chemistry,2015(45)

[2]Influence of splenectomy in patients with liver cirrhosis and hypersplenism[J].Yoriko Nomura;;Masayoshi Kage;;Toshirou Ogata;;Reiichirou Kondou;;Hisafumi Kinoshita;;Kouichi Ohshima;;Hirohisa Yano.Hepatol Res,2014(10)

[3]Autoimmune cytopenias in chronic lymphocytic leukemia at disease presentation in the modern treatment era:is stage C always stage C?[J].Carlo Visco;;Agostino Cortelezzi;;Francesca Moretta;;Erika Falisi;;Francesco Maura;;Silvia Finotto;;Wilma Barcellini;;Achille Ambrosetti;;Antonino Neri;;Marco Ruggeri;;Francesco Rodeghiero.Leukemia&Lymphoma,2014(6)

[4]A DPYD Variant(Y186C)Specific to Individuals of African Descent in a Patient With Life-Threatening 5-FU Toxic Effects:Potential for an Individualized Medicine Approach[J].Saif,Muhammad Wasif;;Lee,Adam M;;Offer,Steven M;;McConnell,Kathleen;;Relias,Valerie;;Diasio,Robert B.Mayo Clinic Proceedings,2014(1)

[5]邓杰.肝硬化大鼠巨脾中M-CSF、TNF-β、IFN-γ和IL-10的表达水平分析[D].海南大学,2016.