小鼠催乳素(PRL)ELISA试剂盒的应用

背景^[1-3]

小鼠催乳素(PRL)ELISA试剂盒是一种用于体外定量检测小鼠样本中催乳素浓度的实验试剂盒。这些试剂盒主要用于科研目的，不适用于临床诊断。以下是关于小鼠催乳素（PRL）ELISA试剂盒的一些详细信息：

小鼠催乳素(PRL)ELISA试剂盒检测原理：试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附试验（ELISA）。具体来说，使用抗小鼠催乳素（PRL）抗体包被于酶标板上，样品中的小鼠催乳素（PRL）会与包被抗体结合。接着依次加入生物素化的抗小鼠催乳素（PRL）抗体和辣根过氧化物酶标记的亲和素，形成免疫复合物。加入显色底物TMB后，在辣根过氧化物酶的催化下，TMB呈现蓝色，加终止液后变成黄色。最后，在450 nm波长处测量吸光度（OD值），通过绘制标准曲线计算出样品中小鼠催乳素的浓度。

小鼠催乳素(PRL)ELISA试剂盒基本性能：

灵敏度：例如，Elabscience试剂盒的灵敏度为0.47 ng/mL，检测范围为0.78-50 ng/mL。

特异性：可检测样本中的小鼠PRL，且与其他类似物无明显交叉反应。

小鼠催乳素(PRL)ELISA试剂盒组成：试剂盒通常包含预包被酶标板、标准品、稀释液、HRP标记抗体、显色底物、终止液等。

保存条件：试剂盒应在2-8°C保存，有效期标注于标签上（通常是6个月）。

样本类型：适用于血清、血浆、组织匀浆、细胞裂解液、细胞培养上主要用于科研目的，不适用于临床诊断。清等生物液体。

在使用小鼠催乳素(PRL)ELISA试剂盒时，应严格按照说明书进行操作，包括样本的采集与处理、试剂的配制、温育时间、孵育温度等，以确保实验结果的准确性。同时，应注意试剂的保存条件，避免使用过期的试剂，并在操作过程中遵循实验室安全规范。

小鼠催乳素(PRL)ELISA试剂盒

使用小鼠催乳素(PRL)ELISA试剂盒进行实验时，需要按照以下步骤进行：

实验开始前，各试剂均应平衡至室温（试剂不能直接在37℃溶解）；试剂或样品稀释时，均需混匀，混匀时尽量避免起泡。实验前应预测样品含量，如样品浓度过高时，应对样品进行稀释，以使稀释后的样品符合试剂盒的检测范围，计算时再乘以相应的稀释倍数。

1.加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100μl，余孔分别加标准品或待测样品100μl，注意不要有气泡，加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，酶标板加上盖或覆膜，37℃反应120分钟。为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。

2.弃去液体，甩干，不用洗涤。每孔加检测溶液A工作液100μl（在使用前一小时内配制），酶标板加上覆膜,37℃反应60分钟。

3.温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分钟，大约400μl/每孔，甩干（也可轻拍将孔内液体拍干）。

4.每孔加检测溶液B工作液（同检测A工作液）100μl，酶标板加上覆膜37℃反应60分钟。

5.温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分钟，350μl/每孔，甩干（也可轻拍将孔内液体拍干）。

6.依序每孔加底物溶液90μl，酶标板加上覆膜37℃避光显色（30分钟内，此时肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度兰色，后3-4孔梯度不明显，即可终止）。

7.依序每孔加终止溶液50μl，终止反应，此时蓝色立转黄色。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。为了保证实验结果的准确性，底物反应时间到后应尽快加入终止液。

8.用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度（OD值）。在加终止液后立即进行检测。

应用^[4][5]

小鼠催乳素(PRL)ELISA试剂盒可以用于转PRL基因小鼠模型的构建与Stat5a的乳腺发育调控机理研究

腺特异性表达PRL基因小鼠模型的建立与分析将p5.2BCN-PRL-BCNpolyA-cmv-EGFP-SV40polyA载体进行线性化处理后,通过原核注射法将质粒注入到FVB小鼠受精卵内,共获得8只携带有外源基因的首建鼠。活体荧光及爪尖荧光检测结果显示,部分小鼠可观察到明显的绿色荧光信号。PRL和cmv片段的PCR扩增结果显示,部分小鼠可扩增得到长752 bp的PRL基因片段以及长599 bp的cmv启动子片段；Southern Blot进一步验证了PCR检测为阳性的小鼠基因组中整合有外源基因。繁殖的部分F2代小鼠,在长波UV灯下部分小鼠发出明显的绿色荧光。外源基因拷贝数的Q-PCR分析结果发现,UV灯下有明显绿色荧光的小鼠外源基因拷贝数达到十个以上,无明显荧光小鼠的拷贝数仅为2个。外源基因整合位点的Gene Walking检测结果显示,有明显绿色荧光小鼠的外源基因插入位点上下游20kb附近不存在其他基因。以上结果表明,采用原核注射法可生产转PRL基因的小鼠,且外源基因在转基因小鼠后代中可稳定地遗传。对转基因小鼠中外源PRL蛋白表达情况、表达PRL对转基因小鼠泌乳及安全性的影响进行了进一步分析。

转基因小鼠主要脏器组织的WesternBlot分析发现,外源PRL蛋白仅在小鼠乳腺及乳汁中表达。小鼠催乳素(PRL)ELISA试剂盒分析结果显示,转基因小鼠乳汁中PRL蛋白含量为611.74-2773.96μIU/ml,是野生型小鼠的77.92～706.80%倍；平均含量为769.24μIU/ml,是野生型小鼠的223.73%倍。QRT-PCR分析发现,转基因小鼠乳腺中乳蛋白(CSN2)和乳糖(B4galtl)基因表达水平显著上升(P≤0.01)。小鼠催乳素(PRL)ELISA试剂盒分析血清中PRL蛋白含量结果显示,泌乳期转基因小鼠血清中PRL蛋白含量显著高于野生型(≤0.01),非泌乳期无显著差别。转基因小鼠平均产仔数与野生型相比不存在显著差异(P≥0.05)。以上结果表明,外源PRL基因仅在转基因小鼠乳腺特异性表达,其表达可在泌乳期促进乳腺中乳蛋白和乳糖相关基因的表达,且对转基因小鼠的生存和繁殖性能无不良影响。

参考文献

[1]A 3,387?bp 5′-flanking sequence of the goat alpha-S1-casein gene provides correct tissue-specific expression of human granulocyte colony-stimulating factor(hG-CSF)in the mammary gland of transgenic mice[J].Irina Serova;Gennady Dvoryanchikov;Ludmila Andreeva;Ivan Burkov;Luciene Dias;Nariman Battulin;Alexander Smirnov;Oleg Serov.Transgenic Research,2012(3)

[2]Bovine prolactin promotes the expression of human transferrin in the milk of transgenic mice[J].Song Li;;Xinbing Guo;;Xiuli Gong;;Miao Xu;;Jingbin Yan;;Ying Huang;;Zhaorui Ren.Biotechnology Letters,2010(6)

[3]The Current State of Chromatin Immunoprecipitation[J].Philippe Collas.Molecular Biotechnology,2010(1)

[4]Milk composition studies in transgenic goats expressing recombinant human butyrylcholinesterase in the mammary gland[J].Hernan Baldassarre;;Duncan K.Hockley;;Benjamen Olaniyan;;Eric Brochu;;Xin Zhao;;Arif Mustafa;;Vilceu Bordignon.Transgenic Research,2008(5)

[5]任艳萍.转PRL基因小鼠模型的构建与Stat5a的乳腺发育调控机理研究[D].广西大学,2014.