氨来诺的有关研究

简述

氨来诺又名氨来呫诺，化学名称为2-氨基-7-异丙基-5-氧代-5H-[1]苯并吡喃并[2,3-b]吡啶-3-甲酸，其分子式为C₁₆H₁₄N₂O₄，分子量为298.29，其原料药性状为米黄色粉末。

1996年，氨来诺经美国FDA批准成为第一个治疗口腔溃疡的处方药。世界上迄今已有20多个国家和地区将它用作治疗口腔溃疡的一线药物。氨来诺过去主要用来治疗哮喘和复发性口腔溃疡等，非经典的IKK相关的酶IKKε和TBK1的近来研究证实其能调节肥胖小鼠的能量代谢、胰岛素敏感性和慢性炎症。氨来诺通过阻断IKKε和TBK1信号途径，减轻慢性炎症、促进胰岛素敏感性，减少可逆性体重，减轻肝脏脂肪变性，是一个极有前景的治疗肥胖病和2型糖尿病的药物[1]。

有关研究

氨来诺作为一个能改善经典炎症(以“红、肿、热、痛”为特征的炎症，亦称为“热炎症”)的老药，其精确的分子机制及作用靶点尚不明确。现有研究证明，氨来诺对于二型糖尿病、非酒精性脂肪肝的肥胖患者也有确切的治疗效果，此作用是通过抑制冷炎症靶点IKKε/TBK1 同源激酶来实现的。但在脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)介导的热炎症中，IKKε的敲除不仅未造成促炎因子表达减少反致其增加。同时也正是在这一炎症模型中，IKKε/TBK1抑制剂氨来呫诺却展现出明确的抗炎效果，这表明IKKε/TBK1一定不是氨来诺对抗热炎症的作用靶点。为了考察氨来诺在热炎症中的作用及其分子机制，以静脉注射LPS引起小鼠内毒素血症作为热炎症体内模型、LPS处理RAW264.7巨噬细胞作为体外模型，分别以Griess法和ELISA法测定氨来诺对热炎症相关因子的效果。以全波长酶标仪扫描氨来诺的激发-发射3D扫描图谱以获得其最佳激发和发射波长，并使用激光共聚焦荧光显微镜确定其在巨噬细胞中的分布特征。在巨噬细胞中，通过RT-qPCR、报告基因、Western Blotting等方法研究氨来诺对LPS活化的NF-κB和MAPK/AP-1通路中关键信号事件的作用。最后，利用分子对接、荧光偏振、无细胞体系酶活实验、基因静默等技术确定氨来诺在热炎症中的作用靶点。结果，LPS致内毒素血症小鼠血清中的IL-6及TNF-α浓度显著上升，氨来诺能显著降低这两种炎症因子的水平，并压制该模型小鼠腹腔灌流液中TNF-α增高。在LPS活化巨噬细胞体外模型中，氨来诺不仅能抑制TNF-α的分泌，还能减少NO的释放以及其合成酶iNOS的活性和表达，并且促进抗炎因子IL-10分泌。

机制研究表明，氨来诺能减少IκBα磷酸化并阻止其降解，抑制了随后的NF-κB p65亚单位易位入核及转录因子NF-κB的活性。另一方面，可阻止ERK1/2磷酸化及下游的AP-1活化。同时，氨来诺可持续增高LPS刺激的巨噬细胞内cAMP的水平、活化其效应蛋白PKA，并影响cAMP/PKA信号调控的胞内氯离子水平和尼日利亚菌素介导的IL-1β释放。而cAMP对抗剂可抵消氨来诺对炎症介质NO、TNF-α的抑制作用。研究还发现氨来诺自身具有荧光，其最佳激发/发射波长为352nm/398nm。利用其荧光特性，检测到氨来诺孵育巨噬细胞十分钟即可完成入胞、主要分布区域为细胞质。分子对接预测，在细胞质中它可能通过π-π堆积和离子键结合到PDE4B水解cAMP的活性口袋中。荧光偏振实验显示，PDE4B可使氨来诺的荧光偏振值单向、持续变大，意味着氨来诺的确可直接与人PDE4B酶结合。而加入另一种非选择性PDE抑制剂IBMX可部分对抗该结合。在无细胞体系酶活抑制实验中，氨来诺不仅可直接抑制PDE4B活性(IC50=11 μM)，也对PDE1A、PDE3A、PDE3B 有效，IC50 分别为 18μM、3 μM、18μM，因此氨来诺对PDE的抑制作用是非选择性的。但在RAW264.7细胞中，PDE3选择性抑制剂并不影响LPS诱导的炎症因子分泌，而敲低PDE4B后氨来诺的抗炎作用全部消失。以上实验首次证实氨来诺是一种非选择性PDE抑制剂。在LPS活化的巨噬细胞中，氨来诺能靶向抑制PDE4B减少其底物cAMP水解，进而激活cAMP的效应激酶PKA。活化的PKA不仅能够通过阻止IκBα的降解及随后的p65转位入核来减少转录因子NF-κB活化，还通过减少ERK1/2的磷酸化来抑制AP-1的转录活性。而对NF-κB及ERK/AP-1两条信号通路的抑制最终会表现为促炎因子iNOS和TNF-α表达水平的降低，从而缓解热炎症[2]。

参考文献

[1]余美霞,沈振新,倪健,等.氨来呫诺的抗炎机制及抗肥胖研究进展[J].中国新药杂志,2015,24(12):1374-1381.

[2]韩宜芯. 氨来呫诺通过靶向抑制脂多糖活化巨噬细胞中的磷酸二酯酶4B发挥抗炎作用[D].北京协和医学院,2022.DOI:10.27648/d.cnki.gzxhu.2021.000451.