二氟尼柳的有关研究与合成开发

概述

二氟尼柳的化学名称为5-(2,4-二氟苯基)水杨酸，又名氟苯水杨酸，是一种化学式为C₁₃H₈F₂O₃，分子量为250.198的有机化合物，纯净物性状为白色固体。二氟尼柳是一种新型的水杨酸类非甾体抗炎，解热，镇痛药物，国际非专有药名为Diflunsial，该药品已经被美，英，法及日本等多国药典收载，首先由美国默克公司开发生产[1]。该物质对轻度和中度疼痛具有止痛作用，能够缓解关节炎、类风湿性关节炎等引起的疼痛，用法类似于阿司匹林，作用时间长。

物理属性

密度：1.437g/cm³

熔点：32-36°C

沸点：249°C（15 mmHg）

闪点：33°C

折射率：1.601

蒸汽压：2.75E-07mmHg at 25°C

有关研究

常数测定

实验考察二氟尼柳在25℃、不同pH值条件下的平衡溶解度(S)、表观油水分配系数Papp及解离常数(pKa)，为二氟尼柳新剂型的研究提供依据。采用紫外分光光度法测定二氟尼柳在水及pH值为4～9的磷酸盐缓冲溶液中的平衡溶解度；采用摇瓶法测定二氟尼柳在正辛醇-水/pH值为4～9的磷酸盐缓冲溶液中的表观油水分配系数；采用紫外分光光度法测定二氟尼柳的解离常数。结果显示，25℃时，二氟尼柳在水中的S值为0.034 47 mg/mL,lg Papp为1.34；在pH值为4.0、5.0、6.0、7.0、8.0、9.0的磷酸盐缓冲液中，S值分别为0.055 04 mg/mL、0.225 30 mg/mL、0.555 60 mg/mL、1.520 00 mg/mL、2.558 00 mg/mL、2.671 00 mg/mL；相应条件下的lg Papp为1.31、1.36、0.93、0.40、0.01、-0.03；解离常数pKa值为5.53。二氟尼柳的平衡溶解度和表观油水分配系数与溶液的pH值相关，随着溶液pH值的升高，溶解度增大，油水分配系数减小，属于生物药剂学分类系统(BCS)Ⅱ类药物[2]。

生物活性研究

为探究二氟尼柳对乳腺癌细胞MCF-7、MDA-MB-231凋亡的影响及分子机制，采用CCK-8法检测不同浓度二氟尼柳对乳腺癌细胞增殖的影响；平板克隆形成实验检测二氟尼柳对乳腺癌细胞克隆形成的作用；细胞划痕实验检测细胞的迁移情况；吖啶橙/溴化乙锭双荧光染色法(AO-EB)分析细胞凋亡情况；采用Western blot(WB)法检测ILP-2、Bax、Bcl-2、Cleavedcaspase-3的蛋白表达水平。结果显示，与对照组相比，二氟尼柳显著抑制MCF-7、MDA-MB-231细胞增殖，且抑制率与药物浓度和时间呈正相关；平板克隆形成率降低；药物显著抑制细胞的迁移能力；细胞凋亡的数量增加，凋亡率呈药物浓度依赖性趋势； Cleaved-caspase-3、促凋亡蛋白Bax表达量上调，凋亡抑制蛋白ILP-2及抗凋亡蛋白Bcl-2表达显著下调，且呈药物浓度依赖性。结果表明，二氟尼柳下调ILP-2蛋白表达影响Bcl-2/Bax信号通路从而促进乳腺癌细胞凋亡[3]。

合成开发

作为一种非甾体抗炎镇痛药，二氟尼柳临床主要适用于类风湿性关节炎、骨关节炎、以及各种轻、中度疼痛。二氟尼柳其作用机制主要是通过作用于环氧化酶，从而抑制前列腺素的合成。该物质是目前市场上十分具有发展前景的新型非甾体类抗炎镇痛药，因此二氟尼柳及其衍生物的合成研究意义重大。Suzuki偶联法的合成路线简单、反应条件温和且收率高，是合成二氟尼柳的有效途径。然而多数钯催化剂难以回收重复使用，使得生产成本较高，不利于大规模工业化生产。因此，开发可回收的钯催化剂及非贵金属催化,实现二氟尼柳的高效合成具有重要的研究价值[4]。

以5-溴水杨酸和2,4-二氟苯硼酸为原料，1 mol%新型结构钯配合物[(NH₂CH₂COOH)₂PdCl₂]为催化剂，纯水为溶剂，碳酸钾为碱，经Suzuki交叉偶联反应在25℃反应6h可一步合成原料药二氟尼柳，分离产率高达90%，粗产品通过简单的重结晶处理后，纯度高达99.1%(HPLC)。反应中所使用的催化剂易于合成、结构简单、性质稳定、催化效率高。该Suzuki交叉偶联反应步骤少、操作简单、产品产率好、纯度高，具有工业应用前景[5]。

测定方法

实验建立二氟尼柳缓释片中二氟尼柳含量测定的HPLC法。方法：C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm)，流动相为甲醇-乙腈-水-冰醋酸(30:70:50:2)，检测波长为254 nm，流速为1.5 mL/min，柱温为室温，进样量为10μL。结果：二氟尼柳检测浓度的线性范围为7.5～52.5μg/mL(r=0.999 9)，平均回收率为99.93%，RSD=0.76%。结论：本方法准确，可靠，重现性好，可用于二氟尼柳缓释片中二氟尼柳的含量测定[6]。

参考文献

[1]梁诚.二氟尼柳开发前景广阔[J].中国医药情报, 2004, 10(1):2.

[2]温莉珍,肖婷,何琳,等.二氟尼柳平衡溶解度、表观油水分配系数及解离常数的测定[J].中兽医医药杂志,2023,42(04):61-65.DOI:10.13823/j.cnki.jtcvm.2023.066.

[3]彭航,向思琦,蒋双艳,等.二氟尼柳调控ILP-2/Bcl-2/Bax信号通路促进乳腺癌细胞凋亡[J].中国细胞生物学学报,2023,45(07):1038-1046.

[4]陈令旗,苏子桢,冯羽,等.非甾体抗炎药二氟尼柳的合成研究进展[J].化工技术与开发,2020,49(06):50-54+79.

[5]刘世文,张苗,王腊生,等.Suzuki交叉偶联法合成非甾体抗炎药二氟尼柳[J].化学世界,2015,56(02):94-97.DOI:10.19500/j.cnki.0367-6358.2015.02.008.

[6]田甜,刘德孝.HPLC法测定二氟尼柳缓释片中二氟尼柳含量[J].实用药物与临床, 2013, 16(2):2.DOI:10.3969/j.issn.1673-0070.2013.02.017.