人神经小胶质细胞的功能

背景及概述^[1]

人神经小胶质细胞分离自脑组织；大脑分左右两个半球，大脑皮质（灰质）覆盖着每个大脑半球的大部分，它是神经元胞体集中的地方。小胶质细胞是神经胶质细胞的一种，相当于脑和脊髓中的巨噬细胞，是中枢神经系统（CNS）中的道也是最主要的一道免疫防线。小胶质细胞(microglia)广泛分布在中枢神经系统(centralnervoussystem，CNS)，从数量上小胶质细胞占中枢神经系统中整个胶质细胞数目的5%～20%。关于小胶质细胞的起源，目前仍有争议。少数人认为，小胶质细胞起源于外胚层。也有人认为，小胶质细胞来源于骨髓造血干细胞。Hortega的经典见解认为，此种细胞来源于中胚层，是胚胎发育后期开始形成血管时侵入脑内的。小胶质细胞是CNS固有的免疫成分细胞，正常情况下处于静止状态，缺乏吞噬功能，但具有吞饮功能和一定的迁移能力。小胶质细胞活化是CNS在许多病理条件下，有时甚至是非常微弱刺激作用下的常见反应，表现为小胶质细胞在局部不同程度的增生与聚集，同时常伴有细胞形态、免疫表型与功能等一系列的变化。

功能^[1]

人神经小胶质细胞的主要功能：①神经胶质出现在大脑发育早期向成熟阶段转化的过程中；②当程序性细胞死亡时，或在大脑发育的过程中，中枢神经系统受损或受到病理损坏时，神经胶质可做为大脑的巨噬细胞；③胶质细胞能在Ⅱ类组织相容性复合体表达CD-4阳性T细胞时表达抗原，能进行Fc介导的巨噬作用，并且与造血细胞和巨噬细胞组织共享抗原。

分离纯化^[2]

取5个月人工药物引产的胎儿脑组织，将脑组织剪碎、研磨、过滤、离心获取混合胶质细胞悬液，用DMEM/F12完全培养基调整细胞密度为2×1010cells/L，接种于75cm2培养瓶中(记作first0d)；7-10d后，进行第1次纯化。此次纯化采用轻柔摇动法将贴壁不牢的小胶质细胞和少突胶质细胞与底层的星形胶质细胞分离并转入另一培养瓶继续培养扩增(记作second0d)；4-5d后，混合的小胶质细胞和少突胶质细胞汇合成片，采用胰酶-EDTA消化法结合差速贴壁法进行第2次纯化。此次纯化将消化得到的细胞悬液离心和重悬，接种于培养瓶(记作0h)；2h后，小胶质细胞贴壁生长，少突胶质细胞依然漂浮在培养上清中，此时通过移走上清以去除少突胶质细胞，即得到高纯度的小胶质细胞；运用激光共聚焦显微镜技术、流式细胞术结合细胞表面或胞内免疫荧光抗体染色技术检测所分离的小胶质细胞CD45，CD11b和CD68的阳性率，以计算其纯度；通过吞噬荧光微球评价其吞噬功能；利用胞膜边缘波动(membraneruffling)现象结合荧光标记的鬼笔环肽染色技术鉴定其活化水平。结果所分离的小胶质细胞中，98%的细胞表达CD45，CD11b和CD68，并且能够吞噬荧光微球。

培养^[1]

人神经小胶质细胞采用酶消化法结合差速贴壁法，在培养基营养缺失数天后经摇床震荡收集脱落细胞制备而来，细胞总量约为5×10^5cells/瓶；细胞经CD11b/c[OX42]免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

主要参考资料

[1]小胶质细胞的发育和功能

[2]人小胶质细胞的分离、纯化、特异分子表达与吞噬功能研究