人胰岛素样生长因子结合蛋白4(IGFBP-4)Elisa试剂盒的应用

背景^[1-3]

人胰岛素样生长因子结合蛋白4(IGFBP-4)Elisa试剂盒是一种用于科研实验的专用工具，主要用于测定血清、血浆、尿液、胸腹水、灌洗液、脑脊液、细胞培养上清、组织匀浆等样本中的IGFBP-4含量或活性。以下是关于该试剂盒的一些详细信息：

原理：采用双抗体夹心ELISA法。用抗人IGFBP-4抗体包被于酶标板上，样品中的人IGFBP-4会与包被抗体结合，游离的成分被洗去。然后依次加入生物素化的抗人IGFBP-4抗体、HRP-链霉亲和素结合物，最后加入单组份TMB底物液。TMB在辣根过氧化物酶的催化下呈现蓝色，加终止液后变成黄色。通过酶标仪在特定波长处测OD值，可以计算出样品中IGFBP-4的浓度。

产品特点：灵敏性高、高效性、吸附均匀、吸附性好、回收利用率高。

保存条件：在2~8℃下保存，最佳温度为6℃。全部为最新批次，有效期为6个月。保存时应避光、低温。

使用范围：仅限科研范围内使用，不得用于临床。

人胰岛素样生长因子结合蛋白4(IGFBP-4)Elisa试剂盒

使用人胰岛素样生长因子结合蛋白4(IGFBP-4)Elisa试剂盒进行实验时，需要按照以下步骤进行：

实验开始前，各试剂均应平衡至室温（试剂不能直接在37℃溶解）；试剂或样品稀释时，均需混匀，混匀时尽量避免起泡。实验前应预测样品含量，如样品浓度过高时，应对样品进行稀释，以使稀释后的样品符合试剂盒的检测范围，计算时再乘以相应的稀释倍数。

1.加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100μl，余孔分别加标准品或待测样品100μl，注意不要有气泡，加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，酶标板加上盖或覆膜，37℃反应120分钟。为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。

2.弃去液体，甩干，不用洗涤。每孔加检测溶液A工作液100μl（在使用前一小时内配制），酶标板加上覆膜,37℃反应60分钟。

3.温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分钟，大约400μl/每孔，甩干（也可轻拍将孔内液体拍干）。

4.每孔加检测溶液B工作液（同检测A工作液）100μl，酶标板加上覆膜37℃反应60分钟。

5.温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分钟，350μl/每孔，甩干（也可轻拍将孔内液体拍干）。

6.依序每孔加底物溶液90μl，酶标板加上覆膜37℃避光显色（30分钟内，此时肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度兰色，后3-4孔梯度不明显，即可终止）。

7.依序每孔加终止溶液50μl，终止反应，此时蓝色立转黄色。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。为了保证实验结果的准确性，底物反应时间到后应尽快加入终止液。

8.用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度（OD值）。在加终止液后立即进行检测。

应用^[4][5]

人胰岛素样生长因子结合蛋白4(IGFBP-4)Elisa试剂盒可以用于7日GnRH-a短方案在IVF-ET中应用效果及对卵泡液中IGF-II、IGFBP-4浓度影响的研究

探讨7日GnRH-a短方案与GnRH-a长方案对卵泡液的胰岛素样生长因子-Ⅱ和胰岛素样生长因子结合蛋白-4水平的影响。

方法:将2007年7～11月进行IVF-ET治疗的146例不孕患者,分成7日GnRH-a短方案组(68例)和GnRH-a长方案组(78例)。7日GnRH-a短方案组于月经第2—8天每天使用GnRH-a 0.1mg降调节,月经第3天加用促性腺激素(gonadotropin,Gn);GnRH-a长方案组于使用Gn治疗周期前的黄体中期注射GnRH-a 1.88mg一次,至垂体完全降调节后,加用Gn。阴道超声监测卵泡发育及子宮内膜厚度和形态变化,记录Gn用量和治疗时间、获卵数、成熟卵子数、受精率、卵裂率、优质胚胎率、种植率、妊娠率和流产率。采用电化学发光免疫法测定人绒毛膜促性腺激素(human chorionicgonadotropin,hCG)注射日血清的黄体生成素(luteinizing hormone,LH)、雌二醇(estradiol,E2)、孕酮(progesterone,P)。收集取卵日的优势卵泡的卵泡液,采用放射免疫法测定胰岛素样生长因子-Ⅱ(insulin-like growth factorⅡ,IGF-Ⅱ)浓度和人胰岛素样生长因子结合蛋白4(IGFBP-4)Elisa试剂盒测定胰岛素样生长因子结合蛋白-4(insulin-like growth factor bindingprotein-4,IGFBP-4)浓度。利用SPSS13.0统计软件包进行统计分析。

放射免疫法和人胰岛素样生长因子结合蛋白4(IGFBP-4)Elisa试剂盒结果:(1)7日GnRH-a短方案与GnRH-a长方案组相比较,hCG日血清孕酮降低(0.58±0.51 ng/ml比0.83±0.54ng/ml,P＜0.05),而hCG日血清LH、E2、每卵子E2及每成熟卵泡E2的水平无显著性差异(P＞0.05)。

(2)7日GnRH-a短方案与GnRH-a长方案组相比较,Gn用量明显减少(1851.65±616.96IU比2726.44±769.28IU,P＜0.05),用药时间明显缩短(8.97±1.45天比11.41±1.43天,P＜0.05)。hCG日子宮内膜厚度较薄(9.80±1.82mm比10.55±1.65mm,P＜0.05),而子宮内膜三线征出现率相似,无显著性差异(P＞0.05)。

(3) 两组平均获卵数、成熟卵子数、受精率、卵裂率、优质胚胎率、种植率、妊娠率及流产率均无显著性差异(P＞0.05)。

(4)7日GnRH-a短方案与GnRH-a长方案组卵泡液的IGF-Ⅱ水平分别为(0.17±0.06)ng/ml和(0.20±0.07)ng/ml,IGFBP-4水平分别为(2915.48±1443.02)pg/ml和(3646.64±1818.67)pg/ml,有统计学差异(P＞0.05)。IGF-Ⅱ/IGFBP-4比值分别为(0.07±0.04)和(0.07±0.03),无显著性差异(P＞0.05)。

(5) 卵泡液中的IGF-Ⅱ与Gn用量呈显著正相关(r=0.316,P＜0.05)。

放射免疫法和人胰岛素样生长因子结合蛋白4(IGFBP-4)Elisa试剂盒结论:(1)在IVF-ET中,7日GnRH-a短方案能获得与长方案相同的控制性促排卵效果和妊娠结局,且7日GnRH-a短方案能减少Gn用量和缩短治疗时间。(2)7日GnRH-a短方案引起了卵泡液中IGF-Ⅱ和IGFBP-4的浓度变化,但卵泡液中IGF-Ⅱ和IGFBP-4的改变并未导致临床结局的不同。

参考文献

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[3]Relationship Between Low-Molecular-Weight Insulin-Like Growth Factor-Binding Proteins,Caspase-3 Activity,and Oocyte Quality1[J].B.Nicholas;;R.Alberio;;A.A.Fouladi-Nashta;;R.Webb.Biology of Reproduction,2005

[4]SERUM INSULIN‐LIKE GROWTH FACTOR‐I AND INSULIN‐LIKE GROWTH FACTOR BINDING PROTEIN‐3 FOLLOWING CHEMOTHERAPY FOR ADVANCED BREAST CANCER[J].Ian M.Holdaway;Barbara H.Mason;Anne E.Lethaby;VijaySingh;Vernon J.Harvey;Paul I.Thompson;Barrie D.Evans.ANZ Journal of Surgery,2003(11)

[5]张建梅.7日GnRH-a短方案在IVF-ET中应用效果及对卵泡液中IGF-II、IGFBP-4浓度影响的研究[D].中南大学,2009.